实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。8 y# G1 o! o% |: s4 W' k$ S6 T
1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
/ z( M) ]7 O2 ~. V/ w1 }5 c2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。
1 Q; Q: {7 L6 \1 {# i! @2 F7 O3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。
! n6 R9 `* s9 E6 w$ O1 s现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，
. a0 y0 T1 A( _2 V1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？) b) V4 }+ @; E+ z, A
2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。
* [& k2 n8 n6 E( L: ^8 E7 }3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

' x. S8 S; `( q2 |- ?' Q
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回复 奇幻雪蓝 的帖子, E% j/ u' ^1 {
# ^7 k; y9 H( r. X- w( m) P

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

* q, E- T6 y6 {8 r" Q5 l' t6 C
铺下去后第一天观察滋养层细胞
; m& `! f0 D/ w* D) B7 L1 x: w8 V2 H) v$ I

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

# x0 U) O) v, O5 Z铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子. r; F; g& |* R/ X
% |. n6 W+ M; x* E# l2 c
1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。
' n& L! ]/ o4 D/ }: U1 m* R2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。
# {9 q. \. ~+ f1 d; z7 S3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

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% N4 L1 I4 `- E) d' L& W* k- z) O9 D4 B$ F& ~9 F
好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子& o% \0 ]3 A( t) p1 m8 @+ g
( P3 f, M' H/ z0 a# V3 c
你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

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% X( i; c9 x4 _" s( X! m3 V& ]; x2 h. s5 k
用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

1 \* m6 @/ [7 g( I9 v, G3 X6 {+ C' I
& r- L/ |7 s  z5 l# F: u( u+ A  U
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染