实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。
" w9 {1 ^% n$ E7 y1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
  D: J; Q0 l, o0 i% p' k2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。, ~7 T% e+ F1 c3 @) X$ @  u
3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。
" j( a. H$ K7 k6 Q+ b; L现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

zxmflying

支原体你是用什么方法测的？所用方法检测阴性不一定就说明你的培养物中没有支原体——因为每种方法都有检测范围的限制。另外，你能排除培养基没有问题吗（如FBS）？建议重新复苏一支试试。

afei198520

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5 ~4 v' h  N, Y+ V8 Y* X1 ^" I" G) g. d# a6 ?
我觉得楼主也应该检测一下血清的内毒素，我们之前买过某进口分装的血清，内毒素超标N倍，绝对没法想象

维维睡啦

你应该测一下内毒素，尤其是血清和培养基的，你们用的血清是否浑浊，有没有絮状沉淀，有的话就是血清的问题。

宋红卫song

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  e% S1 B) T8 L/ [( Y5 v
7 r0 k8 S; Y$ Y8 O9 ]可否告知您用的支原体检测试剂盒是那家公司的？我们上次购买了一个却不太好使。

zkfootball

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* c( ~/ m% T9 S7 j* f6 Z5 H1 ^9 U7 [# q; S, v. O
内毒素和病毒感染该怎么检测呢？

zkfootball

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+ g( W4 M# V) O2 r3 |5 h: O: `3 ]
恩，换个GIBCO的试试

zkfootball

回复 宋红卫song 的帖子0 }( X! q1 q# P9 o! A* H" s) f

: T1 g; |9 L8 S1 K9 s. p# R% {3 b恩，说的有道理。1 G) Y" G$ ~! w  v' _& F
支原体检测用的是试剂盒，做一个PCR反应，阳性阴性control都正常，我的实验组也没有P出条带。

gd541767393

; J  c8 d7 ?' W! Y* P2 M3 Y% D& d) Q; {9 \* H/ s
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染

dahui

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# S& q; j' [" F( B# x- Z1 c6 R) ]4 H& ?" K; M( w, \* D2 e
用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。