实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。
9 H1 s( G/ n. [, r& P1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
( e* G3 |; b1 s+ Q2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。
2 I/ w% H! ^& Q/ ]5 Z3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。  w0 G! y& B, R5 G& y
现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，
3 o7 E. c, }7 v$ Q# q1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？7 F5 T. H- Q4 W
2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。
- \, \# I4 @1 Z1 M5 E0 R3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

, P3 z! e' G& _/ v' r5 l

" F2 B0 D8 K7 R7 n( _: b回复 奇幻雪蓝 的帖子& v$ A5 f& L+ c4 x+ L1 A6 }, t

# a" G2 e! S/ h- ?$ x% V" T

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

, e1 [6 z( h0 L铺下去后第一天观察滋养层细胞1 ~4 b" C! Y; H8 [3 H( J3 A: O  d" [

0 [: C( J0 K3 }3 g5 C7 R$ c

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

: u+ |% o& d7 E  [( o1 ?8 h3 U. \
铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子
  d* U& X: m( z8 k% S/ l, n& C  u5 T, I
1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。0 E7 r8 j$ L  }' K3 O
2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。
4 m3 v% `6 q6 r) Q5 @" t3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

回复 zarecol 的帖子" e9 g4 [* D0 g+ L8 w
2 H% E! j0 H+ I- n
好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子1 J- F) D) ^' X7 Y4 B( L6 H. S

, D% K% U. r3 J8 h你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

回复 zkfootball 的帖子
, x6 _' a7 C+ |7 c3 c
3 z3 m# H; T+ K5 g0 g用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

7 K5 Z& s, Z4 [, v
+ J6 {6 V9 m- a3 k
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染