造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.% o' a! g; C" `- F* ]' D
方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。
$ o8 A2 F8 l1 `' y( k不明白的地方：5 V- p1 T2 p6 z9 H# s
1.CD133的必要性: q4 e- o) g1 p
2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？6 w' v( n) g0 P: ^( Y) e
3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？
4 X: ^' o9 w9 X# ~4.我的这个实验思路无问题8 j5 d( f. c# m* r: C
求各位大侠指点，谢谢！
: x* v) y+ m* {6 }# x   

nailute1985

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* `1 }4 W2 O) v2 f2 `+ \: e4 C* j. P
你们的样本那么不纯的话 结果肯定不准确的。洗涤，裂红这些都需要

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! |3 `' [8 j1 w6 \$ |& y: Q2 m2 t# M
7 ~# d3 A2 Q/ o9 ^- D我们根据您的说话，又重新分析了，发现结果高了差不多一倍。说明样品还是存在问题。我们的造血干细胞的样本里面含采集液，成分很复杂，估计有不少类似碎片东西。下次实验我们想标记前洗涤几次之后再标记，也许拖尾不会那么严重。

SKC-SFC

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$ `6 M. f2 s( v# c( k: d2 I0 l
1 W. J' g4 J3 f  D! Y这个我明白，我们都是调好的，然后检测待测管，这个没有疑问。但我们的第一管是加了细胞和三种同型对照抗体，这个是作为阴性对照来使用的。用待测管的值减去同型对照的值得到最终的结果.

nailute1985

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9 h6 t# B0 [2 e6 \: V调补偿的叫做荧光补偿管，说白了就是一个相对于阳性的阴性管罢了，这个是在实验前就的调好了的

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回复 nailute1985 的帖子: ~' J: b' ?/ M5 U, Z( N

; p6 Y( [  ?* C, k9 E5 L不是吧。调补偿有专门的补偿管。阴性对照跟调补偿毫无关系好吧。一般以前我们是光细胞做阴对只是考虑了细胞的自发荧光，没有考虑细胞与抗体Fc段结婚，所以用同型对照来排除非特异性的干扰。

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子# F5 A8 Q2 f1 o" V4 }  r. p

6 U5 |6 B. P; y  Z5 ]5 W% tR1差不多就是你那个位置，可以再往左来点  觉得你的碎片比较多
9 I+ ^9 u  r$ O, I4 G: D0 ]R4我觉得你的ssc选的高了，往下来点可以 但是你这个r4分了两个群了明显 倒是可以都画进来 但是ssc一定不要太高

nailute1985

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2 \$ s) a  l6 k4 H. U
; }+ q9 |$ N; E! T6 [' k8 U0.2％也正常的  cd34+细胞百分率不是很多的

nailute1985

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6 j& x! C# E$ n% C- E; c% e
1 n1 a3 x0 X5 n3 x4 p& U5管没错啊

nailute1985

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/ r' b% u+ J  i8 {* f( n$ W+ k: J6 Z
晕 阴性对照不是让你调补偿的么，同型对照不是做实验的isotype么