［求助］有关T细胞培养之问题

nailute1985

最近在养T细胞，我们是从cord blood中提的PBMC，然后添加IL2 CD3/28的可溶性抗体刺激，IL2大概500IU／ml， CD3/28 300ng／ml 都是在D0天加的。 现在有几个问题像大家请教一下：
5 J' D& m: q9 F; A% J6 i" |1、现在是D5，细胞增殖很不明显，而且抱团生长十分严重，基本上我吹散了之后，过10分钟左右就又开始抱团了，这正常么？（脐带血当时没有立即处理，4度放了大概20小时左右做的实验）5 @' P3 [' G7 S9 e  Y: p
2、本来一开始打算不换液，只补液的，但是从D3开始 培养基发黄了但是细胞数没怎么变，我想还维持原来的细胞密度2*10^6／ml 所以我直接全量换液了，换完液之后补加了IL2，那这个时候我还需要CD3/28再刺激一下嘛？5 T# d8 m' {% x) p% D
3、D5计数，细胞数比没换液之前还少。* N2 a  {" j% V' ]- v; m
求解～

娟姐姐

细胞抱团生长是正常情况

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子9 J+ N8 Z! G& M+ N# |% U( I1 D

5 n* Y- X9 i, N3 |7 e4 u; Y主要是抱团太快了，是T细胞典型的特征么？我觉得其他的悬浮细胞没有这种抱团那么快的

娟姐姐

轻轻拍打培养瓶就散开了，悬浮生长的细胞抱团正常

nailute1985

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3 [2 y' U- r2 q2 M& D* `3 c2 W7 Z8 r% o" y, ]
我都是用吹的……

醉心科研

7 e$ F+ V8 [* D# N, K
3 l) R3 p% a3 c) m& N" J
回复 nailute1985 的帖子( f9 T. O% U# a9 E: c; _& \8 B
2 g- s4 B2 w9 N8 L& o. J
1 接种密度偏高$ _# ^5 h& Y' @+ g& r5 ^
2 前几天不需换液，实在受不了可以补因子。1 f; O$ `1 T  T9 u5 U4 A1 A/ s, [
3 前7天计数没有太大参考意义。
. v; T. R" q4 q/ r4 补因子的时间与外周血培养不同，是因为脐血都是这样补法吗

nailute1985

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1 s# d! E; B) J- [9 R6 M" I8 @) T3 U6 s" c8 i9 M. q  R' _
嗯，我也觉得2*10的6稍微有点高，下次1＊10的6就可以了。其实按说应该是补液的，但是因为前几天细胞消耗培养基太快了，但是细胞不怎么增殖，我如果再补液的话，细胞密度就下降了，我还是想维持这个密度，所以我就全量换了，然后补的IL，现在的问题就是，我全量换液之后，我的CD3/28还需不需要刺激？有一种说法是：CD3/28加完之后T细胞已经是处于激活状态了，换液之后就不需要补了，还有一种说法是CD3/28可溶性抗原需要存在于培养基中持续刺激，换液的话就需要加…这两种说法我不知道哪个对。

riverdtang

2*10^6已经接近生长密度上限了，调到1*10^6甚至5*10^5都可以，T细胞抱团生长很正常，不要吹散，成团有助于其分泌有利的生长因子

醉心科研

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- ?1 [+ d! T& l! v. F6 C: }- Q" {
: q4 v5 @2 V* s, b0 N$ }  m按外周血T细胞的培养来说，不需要持续加。

nailute1985

嗯嗯 下次我调低点 但是现在我需要计数看看生长曲线，不吹散的话我没办法计数呀，细胞数也不知道了就