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[讨论] 实验室的日常清理,做一名合格的扫地僧 [复制链接]

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发表于 2019-2-14 17:43 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
PCR实验里最怕出现什么问题?当然是辛苦做出来的结果假阳性了。
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当PCR出现假阳性的时候,我们常常会考虑是不是引物/Mix/*等等污染模板,然后一一排查,劳心劳累费时费力,有时还是找不到原因,简直要崩溃。
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这里我觉得要延伸思考一下,这些试剂仪器到底为什么会被污染了呢?其实是核酸气溶胶污染。 1 {/ @" s: v: x

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- g/ W: ^" G% @3 ~0 {  N6 D离心机离心/剧烈地摇动反应管/PCR开盖/吸样时及移液器的反复吸样等等,会产生空气与液体表面摩擦的,都会产生核酸气溶胶,也就是实验室里(或移液枪内)弥漫着含有长短不一核酸片段的小水珠或小颗粒,这些小颗粒沉降(打到)到空白样中导致最后扩增出了条带。
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- o( y! V% `/ Q  N+ i可想而知,这些核酸小液滴还会落到实验台面/PCR仪/移液枪/*头*盒子等等地方,如果我们不注意,这些核酸小液滴就会日积月累地积聚,这样做实验就特别出现问题比如PCR假阳性。3 @& K# A( S6 m! u6 ?
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那么我们平常做实验或者实验室管理上核酸气溶胶(也就是核酸小液滴)产生了巨大的污染究竟该怎么办呢?' h# R& p$ ~6 \5 r) H' d

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1 Q1 `- j. j# a" Y6 e4 i, K大面积核酸污染清除操作方法:
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% W' q8 D! V$ D(1)对污染区域使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行大面积处理,包括:地板、墙面、天花板、门、窗户等地方,同时加大通风量(内循环无用,尽可能外循环);% \& i" W8 o% V) m# {5 a: Y
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(2)对污染区域内的设备使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行反复处理;对超净台等含有空气过滤系统的设备,请更换过滤网;对移液器等污染设备采用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行清洗,高温灭菌;! {! F3 @" C: k5 e9 K8 q2 r' L3 V
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(3)待污染区域及设备器件清理完成后,使用紫外灯辐照4小时以上;
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(4)可请保洁员按照上述要求(1)(2)(3)连续清理三天;
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/ E% p; Q% B4 L(5)设计实验对照组(根据污染源基因片段),进行阴阳对照实验,根据阴性对照确认污染情况,可采用8连排PCR管(2个阳参+6个阴参);若阳参起跳,阴参起跳,则污染需要继续清理;若阳参起跳,阴参全部不起跳了,则说明污染等到控制,可恢复正常实验;
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+ N/ w1 y( F! ]' ?核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)一盒500 mL;10平米的房间需要2盒可完成覆盖;其他设备及器件根据情况进行采购;
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大面积核酸气溶胶污染非常难以清除,若不立即采取清理,污染会更加牢固,长期释放污染核酸,导致实验室停工。
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