请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

牙牙丫丫123

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/ I1 U7 m" ^# E# T8 R请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

zerollx

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三胚层的鉴别. V. O2 a& t7 I* V6 K1 e
  1、形态学观察：ESC在不同的发育阶段有不同的形态，在11天时则出现典型的三胚层形态，可用相差显微镜观察。
: i5 b8 j* _' s- C* _6 p$ Q+ S5 g   2、三胚层中表达的特征蛋白的检测：免疫组化实验检测，EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标
9 D1 a( t/ ^7 G- p' ^% t! G. j4 G志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin
% R0 Z# p; V$ |9 A, Z, K5 c( R 3、三胚层中标记基因的检测：在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR，电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。- x5 A* ~0 }/ p# ]) t6 ]$ @- B
     内胚层：特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达+ W# g. @$ l: z' k! Z" j
    中胚层：波形蛋白等. Z) H/ L! Q6 e% P2 g" u
    外胚层：巢蛋白等5 z) @" o$ A4 ]3 [+ s; `
   具体你可以看这篇文章：体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式

牙牙丫丫123

呵呵，不错……) ~( Y$ Z7 z7 W& J9 `" h

iyaofying888

非常好呀

coralqin

刚想回复呢，仔细一看zerollx 贴出了本人以前发的一篇文章，惭愧:$

细胞海洋

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4 ?+ U# w9 x9 f. v) Y0 D' H) N8 N! k3 G4 C
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jjjk127

好东西 ，学习:)

lp871

:D:D:D

shuishan

请教各位大牛：想做IPS向心肌细胞的诱导分化，请问形成EB后贴壁生长多久可见到心肌细胞，是不是可以见到心肌细胞跳动？上面说15天左右可检测到心肌细胞特异性标志蛋白c TnT，若想用分化的心肌细胞做下一步实验，是不是只要检测到了这种标志就可以了？怎样将其纯化了？好像心肌细胞是不可再生的，那这样分化得来的心肌细胞能否进行传代增殖呢？

细胞海洋

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