关于间充质干细胞培养的一点经验

flyingpnmc

楼主的经验是不规范的实验室做法，如果要做好间充质干细胞的培养，还是需要进行规范的培养，包括培养基的选择、血清的选择及浓度、添加物的选择及浓度、传代比例、消化酶的选择及浓度、消化时间都是要有一定标准的。楼主随机的传代比例对细胞最终传代次数是有很大的影响的。

hygene

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+ A8 L) m* O/ G6 F, L: }
  t8 V3 H' A/ z0 U% M猜测可能是要用那个培养瓶来接种细胞。呵呵。

hygene

我作的BMSC没有离心去胰酶，长势也可以的。

gy82532977

谢谢楼主，我正在养骨髓间充质干细胞啦

luluegret

回复 flyingpnmc 的帖子- Z. w1 b+ o% b- m' c7 u* c5 D, a3 q
$ K% l, l* N2 ~/ q4 _3 r
求规范的做法！9 S) [, {# X' I3 J, e) [+ ]9 q# H3 g
因为我们也是临床的研究生在做实验，所以根本没有正规的培训规程，* [5 W4 N/ y. O3 F* j0 r
都是师姐师哥一代代流传下来的方法加上自己的所谓“改良”
  s4 b/ b6 A" Y非常希望您能提出一些规范的方法以供改进
6 C& {: z) J# y多谢！

flyingpnmc

最基本的起码要：
0 q2 H4 y. b- f9 @. E选择适合本实验室细胞的培养基和血清；$ ^5 g' P. X' M' r) ]
细胞接种比例是相对固定的；- w  J) r9 a" J/ Y( _
细胞传代时的融合度要相对固定；0 f/ p. g9 h$ q) O
不同的间充质干细胞有相对稳定的传代范围适合做实验，比如3-10代（打个比方），细胞表型、大小、传代时间都相对稳定，实验结果也稳定。

突击兵之小土豆

       先介绍一下bFGF:6 R  d0 e5 L: [" i8 u% p) s
       早在1940年，Hoftman等在脑和垂体的抽提物中发现一种能够促进成纤维细胞生长的物质。1974年该物被分离纯化，并命名为成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor， FGF）。接着，人们又分离出一种与之高度同源的物质，由于它含有较多的酸性氨基酸碱基，等电点为酸性（5.6），故命名为酸性FGF（aFGF）。先发现的FGF因对酸和热敏感，等电点呈碱性（9.6），则称为碱性FGF（bFGF）。aFGF和bFGF与后发现的int-2、FGF-5、角质细胞生长因子（KGF／FGF-7）、hst-1／kfgf、FGF-6基因表达产物……共9个成员组成FGF家族〔1，2〕。. t  L& G% F4 Q1 t$ y5 B) a
   关于其作用：/ M. \1 N9 r7 a
   bFGF的生物学效应分体内和体外两大部分。体外作用十分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有很强的促细胞分裂增殖活性〔10〕。体外细胞培养中能在低浓度（1 mg·ml－1）发挥其作用。bFGF是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子〔11〕。其主要生物学作用有：（1）作为血管生长因子；（2）促进创伤愈合与组织修复；（3）促进组织再生；（4）参与神经再生等。
5 ?% l6 j$ x. M6 m4 U! e9 f# _) T7 }/ H* k
以上信息来源于http://baike.baidu.com/view/1031552.htm#3
1 S0 D( s3 L( x/ J% n. R2 j3 {7 e- g2 M! o
个人认为其作用应该是促进干细胞有丝分裂，刺激干细胞的生长。其传代培养中应用较多，还有就是从组织中分离出细胞时也有较多应用。

突击兵之小土豆

回复 dwl1209 的帖子. O: H% P! G9 D4 f! L$ b: _# F6 |

# A4 S  \3 X7 [  t- b. P 先介绍一下bFGF:& f4 r! Y$ |( L' d, Y
       早在1940年，Hoftman等在脑和垂体的抽提物中发现一种能够促进成纤维细胞生长的物质。1974年该物被分离纯化，并命名为成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor， FGF）。接着，人们又分离出一种与之高度同源的物质，由于它含有较多的酸性氨基酸碱基，等电点为酸性（5.6），故命名为酸性FGF（aFGF）。先发现的FGF因对酸和热敏感，等电点呈碱性（9.6），则称为碱性FGF（bFGF）。aFGF和bFGF与后发现的int-2、FGF-5、角质细胞生长因子（KGF／FGF-7）、hst-1／kfgf、FGF-6基因表达产物……共9个成员组成FGF家族〔1，2〕。& B& v4 a4 u% A+ r. f" R# b
   关于其作用：
9 U' D; i% ]: N3 Y   bFGF的生物学效应分体内和体外两大部分。体外作用十分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有很强的促细胞分裂增殖活性〔10〕。体外细胞培养中能在低浓度（1 mg·ml－1）发挥其作用。bFGF是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子〔11〕。其主要生物学作用有：（1）作为血管生长因子；（2）促进创伤愈合与组织修复；（3）促进组织再生；（4）参与神经再生等。
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以上信息来源于http://baike.baidu.com/view/1031552.htm#3) q# q2 Y6 g( v! J  r+ o

! i  H, M6 X& ^) V: Z. k  Q个人认为其作用应该是促进干细胞有丝分裂，刺激干细胞的生长。其传代培养中应用较多，还有就是从组织中分离出细胞时也有较多应用。

wangyimei

细胞的传代中，胰蛋白酶是否要通过离心去除，还是要看在胰蛋白酶配制的时候是否加入了EDTA，如果没有加EDTA，那么直接加含有FBS的培养基终止消化不需离心去除，因为FBS会中和胰蛋白酶的作用，对细胞没有影响；但有的细胞只用胰蛋白酶消化比较困难，所以加入了EDTA，若用这种胰蛋白酶进行消化就需要对中和之后的细胞进行离心以去除胰蛋白酶，主要还是去除EDTA，因为EDTA的存在会影响细胞的贴壁

水兰色

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$ M: ~$ @9 F* J/ e/ E# h/ [8 U2 m) A" t* ?6 I8 h" \
应该是要用旧瓶吧