关于间充质干细胞培养的一点经验

第一心音

我用胰酶消化，细胞很好，但是胰酶要多稀释几倍消化，可以不离心的。我的细胞也还可以。10%的FBS，细胞长势已经不错啦。bFGF对经过多次传代的细胞不敏感.；产妇年龄是很关键，还有脐带的状态，胶比较多的脐带更好。顽固细胞不能再要了，消化下来也不贴壁。还有可以用PBS多洗几遍传代比例一定呀看细胞状态，不能一概而论。最好不要传的比例太大，那样细胞长不好，还有，培养基一定要预热

叶婷

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. i, X8 S8 s0 y9 _49楼第一种方法是我们常用的！就是要离心2次！洗2次细胞！不同的是我们用DMEM洗!第一次离心时为15oorpm5min,第二次离心时为1200rpm3min.作用是可以把胰酶洗干净！
7 @! D3 ^+ H  R( ^但是在原代MSC传代消化时只离心1次1200rpm5min，即可传代，因为在培养基中保留一点组织块有利于细胞生长！经过试验得出！细胞会围绕着组织块变形贴壁生长！

叶婷

回复 sdwzg119 的帖子- n4 Y& S% S" x9 t' M  P3 ]( A7 P
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把离心的rpm控制好应该没问题的！同时也需要把ACC（即开始离心时升高的速度）和EGC（即快离心完减慢的速度）控制好！一般各设为7和4！

叶婷

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& ~& k$ b6 v9 J% D那你们解冻细胞时也不离心吗？那冻存液如何洗掉呢？冻存液中的DMSO可是有毒的哟！用含血清的培养基终止胰酶继续消化！但胰酶还存在细胞中呀！毕竟会对细胞造成影响呀！我觉得把rpm控制好问题不就解决了吗？

叶婷

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加胰酶的培养基放37°CCO2培养箱中3min可以促进消化！去掉胰酶是不会丢失细胞！因为离心后细胞沉降！胰酶在上清液中！

金戈

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0 j( t3 J* F. I$ g血清灭活通常是采用56°C 30min的方法。可以将其中的补体等成分灭活。不知道您是培养什么细胞。

nicholas_cyy

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2420527

我们都用无血清培养基，效果很好

clayluo

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+ c) d% Z' H+ ^% O/ H8 [# {/ H8 Y& `1 _' L/ }. [5 n
有些细胞对胰酶非常敏感的，即使是极微量，所以还要根据具体情况来决定离心还是不离心，不能一概而论。

xulingous

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) f0 y4 \8 g0 l嗯 一般都用LG吧。。。
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