关于间充质干细胞培养的一点经验

水兰色

貌似脐带MSCs比骨髓MSCs娇弱，大家有没有同感？

yanmin

我也是做脐带间充质干细胞，现在一般细胞传一两代后细胞状态就不是很好了，细胞很容易分化，原代细胞不是很好消化，细胞不能消化成单个的，而且细胞按照1:2的比例传代，第二天会有很多飘起来的细胞，想和大家讨论一下，看看大家有没有什么经验可以分享~补充我的原代细胞是按照组织块贴壁培养的。

yanmin

我也是做脐带间充质干细胞，现在一般细胞传一两代后细胞状态就不是很好了，细胞很容易分化，原代细胞不是很好消化，细胞不能消化成单个的，而且细胞按照1:2的比例传代，第二天会有很多飘起来的细胞，想和大家讨论一下，看看大家有没有什么经验可以分享~补充我的原代细胞是按照组织块贴壁培养的。

hwlightning

楼主，我觉得少量胰酶对MSC细胞的生长没多大影响
5 \! c0 y* W1 \. {3 e; ~* w我用计数法检测细胞生长周期，24孔板用200微升胰酶消化，再加了300微升完全培养基，混匀技术后就没管了，  U4 \9 j% ?, E2 s7 q
第二天我在看的时候空里面的细胞又重新贴壁了，而且长的挺好，显微镜观察细胞还是挺典型。
% K- e" z% x% D, x  S# z1 K我用的是脐带间充质干细胞。
" g+ r# L: \3 ?1 S* l8 ^. M/ T: h. X细胞的其他功能还存不存在我没有进步鉴定。

dophins

我没有加bfGf，细胞传代后生长缓慢，而且容易分化，是不是和bfGf有关啊

hnsdlgl

骨道边 发表于 2011-7-19 23:43 7 [- X# J2 f2 z. I
楼主有干细胞培养的protocol吗，急需一份啊，我也一直在养干细胞，可是一直出不来，老鼠都被我宰了N个了，实 ...

6 \* Q3 r9 T# C( c
鼠的MSC是不太好办，但就生长而言，小鼠的比大鼠的容易养出来，但是小鼠msc最大的问题就是：要纯化很麻烦，通常要纯化好几代才能弄到纯度较高的MSC。' k& c4 I# r7 s! u7 e( p
/ b2 I- p1 `# U) f1 S; g2 \
现在我都不养小鼠MSC了，改养人脐带的，这种细胞不仅很容易养出来，而且原代就比较纯，且如果操作得好的话，这种细胞通常能传到接近20代，当然做实验最好的窗口还是第5代-第8代。如果没有什么特别原因，只能用鼠的MSC，不妨试试脐带的

demonleaf

楼主血清用的是什么牌子啊？

天枰2012

楼主说细胞P7-P8就老化了是在加因子还是不加的情况下啊？另外不是说加因子容易诱导细胞分化吗？你的有没有这种情况啊？

zhang0194

回复 sdwzg119 的帖子: e- m$ F! _2 Z- O; p% l- n* N- y
  |' u, C! _' l6 D) Y8 U
这个实验我们做过一次，如下：
$ l( L  e7 o2 [4 T$ S  1.消化后把胰酶离心除去，然后吹打均匀后再加PBS洗一次，离心除去，传代。
+ M  K5 k, m* t( k. {  U  2.消化后把胰酶离心除去，吹打均匀后直接传代。
- ?& x3 P- l% Z( R4 C# q% m# ?这2个程序就相差一步，但是用第一种方法传代的细胞比用第二种方法传代的细胞长势好，并且贴壁牢！

cx4236850

首先感谢楼主的经验，学习了。离心的参数大概多少，想问下。。。. p4 H9 Y9 j5 C; v9 l