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干细胞检验
1 |' _; K: Q% s& g) R （1）细胞鉴别! K9 h* G& d: M& U2 P' Q
应通过细胞形态、遗传学、代谢酶亚型谱分析、表面标志物及特定基因表达产物等检测，对不同供体及不同类型的干细胞进行综合的细胞鉴别。
f' b* y4 s' E, P+ g% F （2）存活率及生长活性
$ z. o; C1 p+ p9 ^- z" S采用不同的细胞生物学活性检测方法，如活细胞计数、细胞倍增时间、细胞周期、软琼脂糖胶内克隆形成率、端粒酶活性等，判断细胞活性及生长状况。, Y8 }: z! M) {! k) s% }% u
（3）纯度和均一性 _/ t9 D3 Z1 G: g
通过检测细胞表面标志物、遗传多态性及特定生物学活性等，对制剂进行细胞纯度或均一性的检测。对胚胎干细胞及iPS细胞植入人体前的终末诱导分化产物，必须进行细胞纯度和/或分化均一性的检测。# O% l/ }" s# }4 u6 m% t1 ]9 K- D
对于需要混合使用的干细胞制剂，需提供各独立细胞来源之间细胞表面标志物、细胞活性、装量、纯度和生物学活性均一性的证据及标准。3 Q% [' v' Q1 q C. |0 L+ b
（4）无菌试验和支原体检测
) K0 L9 m& E& @% h# m4 O; I应依据现行版《中华人民共和国药典》中的生物制品无菌试验和支原体检测规程，对细菌、真菌及支原体污染进行检测。. Y. B! h0 ^- [5 [& E
（5）细胞内外源致病因子的检测
4 j; g! A/ d( v: M应结合体内和体外方法，根据每一细胞制剂的特性进行人源及动物源性特定致病因子的检测。人源特定病毒包括HIV、HBV、HCV、EBV、CMV等；如使用过牛血清，须进行牛源特定病毒的检测；如使用胰酶等猪源材料，应至少检测猪源细小病毒；如胚胎干细胞和iPS细胞在制备过程中使用动物源性滋养细胞，需进行细胞来源相关特定动物源性病毒的全面检测。另外还应检测逆转录病毒。" T7 u2 J2 W4 t' Q5 p. y
（6）内毒素检测# |1 ^# h/ l! X- @5 Z0 j
应依据现行版《中华人民共和国药典》中的内毒素检测规程，对内毒素进行检测。6 ?$ R3 b, M$ d8 ~5 U
（7）异常免疫学反应, U& P; o: I4 ~9 f$ ]
检测异体来源干细胞制剂对人总淋巴细胞增殖和/或对不同淋巴细胞亚群增殖能力的影响，或对相关细胞因子分泌的影响，以检测干细胞制剂可能引起的异常免疫反应。! }2 c! O* V5 [0 _, T$ [6 b" M1 Y' x6 }
（8）致瘤性1 M5 ]" U2 e' |9 J" l, a% X' t- b5 |
对于异体来源的干细胞制剂或经体外复杂操作的自体干细胞制剂，须通过免疫缺陷动物体内致瘤试验，检验细胞的致瘤性。
. E5 d* G+ E* |8 a5 n" q* P$ ~' K* _+ } （9）生物学效力试验
2 f" B9 l4 F, T, V! h8 N可通过检测干细胞分化潜能、诱导分化细胞的结构和生理功能、对免疫细胞的调节能力、分泌特定细胞因子、表达特定基因和/或蛋白等功能，判断干细胞制剂与治疗相关的生物学有效性。
( O B5 B/ a+ t对间充质干细胞，无论何种来源，应进行体外多种类型细胞（如成脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞等）分化能力的检测，以判断其细胞分化的多能性（multipotency）。对未分化的胚胎干细胞和iPS细胞，须通过体外拟胚胎体形成能力，或在SCID鼠体内形成畸胎瘤的能力，检测其细胞分化的多能性（pluripotency）。除此以外，作为特定生物学效应试验，项目申请者应提供与其治疗适应症相关的生物学效应检验内容及结果。; R: a" I$ _3 ?% a5 \* W' n/ D6 u
（10）培养基及其他添加成分残余量的检测7 q! p7 J: n- a1 f
应对制剂制备过程中残余的、影响干细胞制剂质量和安全性的成分，如牛血清蛋白、抗生素、细胞因子等进行检测。3 V- a) M z! N7 o
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发表于 2014-2-6 05:08
发表于 2014-5-5 09:02
