对于DC细胞的一些疑问，请师兄解答!!

冠忠

我在文献中看到好多有关培养DC细胞及令DC细胞成熟的方法，我有以下几个问题，希望师兄可以帮忙解答，谢谢# w  e- K- t# d0 c+ m
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1.        我想知道，DC细胞培养是否跟普遍adherent细胞培养方法一样，长满了就可以做subculture?但是我见到有师兄说，有时间DC细胞是不会贴壁。- V1 ?, H# x& Z' E0 ?' P$ x
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2.        一般来说，DC细胞可以增值多少代?如果用100毫升周边血，一开始应该用T25培养皿先培养吗?+ o1 l6 Q' T+ Q5 p

5 Y3 `% y: n5 J' B( g9 F3.        我想知道，现在文献说，用I=RPMI-1640, GM-CSF 和IL-4的培养液培养出的DC细胞是否叫Immature DC细胞>? 加了TNF-Alpha培养的是叫mature DC细胞? 对吗?; _5 L/ a9 Y3 O! E+ s
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4.        在文献中，我看到好多文献说，mature DC细胞先可以产生作用，那么如果用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上有什么不同? 那一个较好?
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  x) F. w3 R- D8 t: L; N/ u谢谢& z+ @1 C+ z2 h& _( F8 t

apai2003

1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF 和IL-4诱导单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟DC会逐渐悬浮起来；
6 v( g% W5 c: R3 w2.单核细胞来源的DC是不可以增值的，一个单核细胞只能转化成一个DC细胞；具体用多大瓶培养要看你拿到的PBMC数量（再细的话还可以考虑里面单核细胞的比例），我们一般按照3x10^6/ml的密度铺瓶，通常情况下，100ml外周血拿到1x10^8的PBMC应该没问题，可以采用T75培养瓶；
% k( D' C- a8 {1 U7 u: g- x& c3.成熟DC和未成熟DC不能简单按照加了什么因子来决定，目前主要根据细胞表型来判断，未成熟DC低表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，而成熟DC高表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，且表达DC成熟标志CD83，通常用GM-CSF 和IL-4来诱导单核细胞向未成熟DC转化，之后可以用TNF-Alpha来促使未成熟DC向成熟DC转化；
( W& S/ {# b9 P+ i$ e) R1 I# s4.没太明白你的意思，但目前临床治疗用的DC普遍都是负载特定肿瘤抗原的DC，这样回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。
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单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。
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单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。' f- o$ U& {0 o$ E7 E* ^4 f1 c4 z
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冠忠

大少爷 发表于 2012-7-23 11:41 4 g9 k7 z/ W4 D
用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上 ...

6 n6 S/ G# l! J9 x8 @0 {/ N谢谢师兄的解答。& f7 Y% \9 [* R5 f5 b- |5 W
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想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。0 @* V2 Y7 @' v
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谢谢. v' o2 U) E2 s+ E

冠忠

apai2003 发表于 2012-7-23 09:12
. z; F9 N* D8 P6 U! @5 Z4 v+ K1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF ...

4 _- m, d2 q" E1 X. m4 D# f, Y: R
谢谢师兄的解答。/ o; ~% \) C! i' @5 x

6 _' s6 l! |* p想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。
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: a, w# R* w  Z* ?5 X5 |- p' r; n谢谢' G; B' Y( A5 I1 Q# t

大少爷

肯定要加