关于细胞周期时长检测

Sakya

各位大侠，如果我想检测某种组织细胞细胞周期G1，S，G2，M四个期以及整个细胞周期的时间长度，请问需要采用什么实验技术？

knowtumor

经典的方法是，H3-TDR一次性标记，定时连续取材。制备切片，放射自显影。计数被标记的有丝分裂像的百分数。连续作图便可计算出。# m4 c4 l8 Y. I$ Y5 q

% y6 @2 ^0 F/ z$ Y! HFACS不能测。

Sakya

好弄吗？用核素标记核苷酸？

knowtumor

80年代和90年代初的时候H3-TDR还很多人用。现在恐怕没人用了，谁还卖？

Sakya

现在人们用什么方法检测细胞周期时长呢？？？

knowtumor

It is a lost art. 5 {6 ?: H8 Z1 a0 h- @: D

Sakya

楼上能帮我设计一个简易的测定细胞周期时长的方法吗？

knowtumor

H3-Thymidine 可用BrdU取代。2 Q. |0 d& a9 a4 s  f; A5 p2 K5 K

5 d; Q# Q4 D8 {8 ^5 ]4 `' H比如小鼠肿瘤，一次性注射BrdU,间断取材。30 min, 1hr, 2h, 4h, 6hr,12 hr,24h, 48hr, 96h; 肿瘤的细胞周期偏长，一般在20-100hr。有超过100hr的。
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0 H, z; U* H# ^1 S' j3 }& j将各标本制备石蜡切片，免疫组化做BrdU染色。计算Mitotic figure中BrdU的阳性率。做动态曲线图，可计算出。
3 e# E9 ]1 |& q$ v* f# z) ~# d* y$ J' k# T8 l) n: c- \$ o9 H) o% [$ C

Sakya

thanks

Sakya

能不能把现在的流式细胞仪改进一下，让它可以测定细胞周期各期时间长度？