脐带组织块贴壁法求助

老姜

从你照片上看你养的细胞不像污染，好像组织块不太均匀，接种后再摇摇，尽量铺均匀点。不换液时不要动培养器皿，利于细胞贴壁。

dongxin

回复 湖南干细胞 的帖子9 ~  _9 Q( j! M' q$ f' d$ v- P
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用PBS洗，然后种块，个人觉得“倒置”影响不大，我试过倒置和不倒置，都一样爬细胞。供参考

jxydiandian

建议：1.剥脐带前先用75%的酒精将脐带泡3-5min，目的是软化脐带外面的一层薄，然后将膜撕去，这样在后面剪组织块的时候才能剪得更碎。
' r# w9 a6 u/ o- T+ p          2. 你的组织块太大了，而且剪得时间也太长，操作脐带的时候注意不能让它太干了。/ M' O# J2 W- y& P; S. z
          3.组织块剪好后加培养基混匀贴壁即可，不用像你上述的那么麻烦。放进培养瓶后不要老动它，不然组织块不贴壁，就没法爬出细胞。
+ l6 V2 F4 ^# k/ M! m) _3 I          4.培养基的量以使组织块能贴到壁，但又不能太少，否则很容易就干在上面了。. ?+ Z+ i2 G0 P* T1 Z3 ?8 r+ V
小小建议，仅供参考。

newjack920

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同意楼上的建议，脐带先用75%酒精浸泡洗3-5min，然后剪取脐带中间三段，每段约2-3cm（看你需要多少细胞了，要的多就多剪几段）移到10cm一次性平皿中用生理盐水清洗血迹等，然后再另一平皿中分离华通氏胶，2根动脉，1根静脉去除，然后就是剥胶，脐带外膜不要。将分离下来的华通氏胶转移至50ML离心管中剪碎，各种文献上都说要剪碎至1MM3，但这不是很好做到，大概就行，别太大，1-3MM3都行的，剪碎后加培养液至离心管，混匀后直接接种，一般剪3段2-3CM的脐带，我们实验室都是接种到3个T75瓶中，隔3天换液，大约10天细胞达50%以上

猩猩

建议你的组织块再剪小一点，不要太小，免得影响贴壁，还有你培养瓶的组织块量有点大，没有留出足够的空间给细胞爬出，还有哦，你在剥离血管时可以不剪开静脉，从而可以剥除整个静脉腔， 这样也可以减少操作时间和污染率哦。  “注射器针头挑取小组织块从瓶底向瓶口铺好”你这一步会增加细胞污染率

lazyworm

剪得太大，工欲善其事必先利其器，一定要选择好剪刀，弯剪比较好剪。接种的太密了，75cm2的瓶子一般种0.5g到0.8g。培养基的量也不能加太多，以免不好贴壁。有时候胶水肿了，会发黄或者透明。

湖南干细胞

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好的，以后选择弯剪刀试试。

湖南干细胞

回复 猩猩 的帖子" Q% k9 H" ~1 g3 G$ S, S3 F
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好的，以后直接剥离静脉看看。尽量减少污染。

湖南干细胞

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1 y0 @( g" X% b! Y& M谢谢指点，这是接种第5天我拍摄的照片，上面的是间充质不。这种情况下可以换液了不？

孙帅帅

1、组织剪切的过程可以适当滴加1~2滴培养液以保持湿润；
+ _; X) G5 U! R& d( z' g5 \2、如果组织不易贴壁生长最好把培养瓶底部加几滴薄层血清或者鼠尾胶原；
5 Y5 u# b8 G/ A/ Y3、每小块间距5mm左右，最好不要贴在一起；
/ a9 t& ~) E4 P4、组织块也可不用翻转法，即在摆放组织快后，向培养瓶内仅加入少量培养液，以能保持组织块湿润即可，盖好瓶盖，放入培养箱中培养4~24小时后再加培养基培养。