脐带组织块贴壁法求助

湖南干细胞

谢谢各位指点。

湖南干细胞

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" p: `7 P5 e2 T+ A2.26日做了一次组织块贴壁法培养，12小时后添加培养液时就基本上漂浮了，但是还是爬出来很多细胞，3.2日1/3量换液，拍照如上1。3月5日，3月5日镜下观察基本上没细胞了，只有碎片照片2，培养瓶里的组织块全部都漂浮，部分发黄，培养液颜色变得很淡，后2张照片所示。
3 O$ ?) M6 C1 }6 k& s! A4 ^- @这次本来爬出很多细胞，结果还是细胞死亡了，是不是培养液换得不够，细胞营养不足？

单个核细胞

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你确定有细胞从组织周围爬出吗？从你的描述以及照片加上时间推断，不大可能，你注意看一下是不是培养瓶底的东西，而不是你说的“爬出来很多细胞”。6 @" s  s! y/ y! \

6 n5 }* h/ m* O我这里附上一张组织周围爬出细胞的照片，如下图。8 ]) I2 q" |, l' ~
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老姜

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& W9 `4 U4 d# p- i5 Q% [照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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$ W5 E4 l6 g" ?% \. `( w0 J照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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3 m/ V5 q( ]5 P* M3 _/ e照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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/ d  \' _- a2 u' G& t43楼的细胞照片，梭形细胞长成大片了在右下角还见组织块了。你再细细琢磨琢磨。

湖南干细胞

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2 t! I2 K/ ~0 L, M4 Z我的组织块贴壁不紧，9小时，第1次添加培养液时就基本上全飘了。后两张是爬出来的细胞，肯定不是皿底的东西，是爬出来的细胞，最一张是细胞碎解了。

湖南干细胞

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& u4 t3 y/ ]( K( ]8 t我的细胞基本上没有长成成纤维样的，但是瓶底用FBS铺了，确实是从贴壁9小时添加培养液时就有细胞爬出来，组织块贴壁不紧，常在第一次添加液体时就已经漂了，3-5天后换液细胞状态还可以，再过1、2天，细胞就碎了。是不是组织块贴壁不紧。

单个核细胞

9 V" F4 Y+ c% H& Q9 L! P
3 S9 ?) f% z2 ]; Z: _5 n; H" q- o" d9 ]回复 湖南干细胞 的帖子
, P! z# q( p! f: L* e3 g/ _
, s/ t/ `! F" \* x组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。
4 \% _# J( G" U8 _9 v, \* K5 {  P
另，参考下面的链接：
: k7 x) e0 \, c" b' O+ j+ G5 H
# O; j7 A7 B' }2 F7 j: C1 [脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：5 h( o; g# y4 {- _( a/ k* p
http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid5540202 d, |, Z: j- C+ P
请教华通氏胶的剥离：
2 n6 ~8 t0 l3 e0 v% P. Ehttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html2 y: L0 d, \! p
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：5 C1 N, |$ z1 I/ ~3 t6 W
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html) E* G2 m: U+ w7 x# ]# I" S: @
脐带间充质胶质的备置：( N5 h0 K$ l' x- ]7 m
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html* u& z- c9 t; C4 ^; D. S. \
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：" n% l1 D$ O1 E) c8 D1 h3 q
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
9 h2 ~0 _6 X7 L( ]. o脐带间充质贴壁法到底几天换液：, L8 \3 S) h% I1 H7 B% Z2 [
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
1 O; T4 O0 k) p, }/ A6 k9 k各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗?
7 C9 O+ t' v5 V2 ~5 T" Thttp://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html
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