脐带组织块贴壁法求助

湖南干细胞

谢谢各位指点。

湖南干细胞

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! S" Y8 ~$ A8 P2 j1 w- a4 T2.26日做了一次组织块贴壁法培养，12小时后添加培养液时就基本上漂浮了，但是还是爬出来很多细胞，3.2日1/3量换液，拍照如上1。3月5日，3月5日镜下观察基本上没细胞了，只有碎片照片2，培养瓶里的组织块全部都漂浮，部分发黄，培养液颜色变得很淡，后2张照片所示。
: |' [+ p" ~" P/ R# }; q这次本来爬出很多细胞，结果还是细胞死亡了，是不是培养液换得不够，细胞营养不足？

单个核细胞

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1 I2 @3 S" d! L# L$ Q# T回复 湖南干细胞 的帖子
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你确定有细胞从组织周围爬出吗？从你的描述以及照片加上时间推断，不大可能，你注意看一下是不是培养瓶底的东西，而不是你说的“爬出来很多细胞”。
" u8 i$ L& C/ {% ^6 h/ X* a0 Q
) ]! F/ p. l4 l  w, V0 \  d我这里附上一张组织周围爬出细胞的照片，如下图。
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老姜

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/ y; k0 ?& c' o  g" I照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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8 y, g) m1 \% D; B! i: C  o
: ~! I$ G3 f! b8 t' d照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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* z! ?+ K6 A$ k) W; I- V. e# A3 l) h照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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8 J, f  @; u2 {! L# i) R- C
& ^" [5 c6 k: T2 S$ `43楼的细胞照片，梭形细胞长成大片了在右下角还见组织块了。你再细细琢磨琢磨。

湖南干细胞

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0 i8 ^' _4 D3 @, S$ F
+ ~- ]$ l& W4 F% P" M( ]我的组织块贴壁不紧，9小时，第1次添加培养液时就基本上全飘了。后两张是爬出来的细胞，肯定不是皿底的东西，是爬出来的细胞，最一张是细胞碎解了。

湖南干细胞

回复 单个核细胞 的帖子3 J* K0 @9 q2 k( }+ V: V4 }
8 q% _4 L. {& D% \1 O- Q" Y" E2 l
我的细胞基本上没有长成成纤维样的，但是瓶底用FBS铺了，确实是从贴壁9小时添加培养液时就有细胞爬出来，组织块贴壁不紧，常在第一次添加液体时就已经漂了，3-5天后换液细胞状态还可以，再过1、2天，细胞就碎了。是不是组织块贴壁不紧。

单个核细胞

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4 X* t& x; Y$ b- Q
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6 _7 R& K8 Y- n组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。4 K7 S* E# j! t9 j6 n

1 b. U; w1 I. {( c' b" b另，参考下面的链接：" M8 b8 R# j  w+ c9 t; K* s

" c) i! p# h5 }8 V5 z脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：" p: ?% W2 v  B4 _
http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020
" M0 B) F. K% Y7 u1 _7 W请教华通氏胶的剥离：
$ m: H& k# G# h( d& }http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
: ~, J& o( `: J/ W6 ?/ X* ?6 V  n应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：
! {+ _; j6 j5 N" a  _! a8 |1 Thttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html5 _1 {0 k) c2 v. S! S; I" @- q$ x# {
脐带间充质胶质的备置：
4 r# O- O: {) J, ]0 r  B) Jhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
6 `  e* f( l+ O' B! L% d) O脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：" `+ y) u; C' R  V
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
( o# o: z, t1 I6 H0 ^- J2 \脐带间充质贴壁法到底几天换液：9 J+ X0 x+ U( k3 G: K1 M
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html3 m: a' \4 L; N3 p  x8 |& u
各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗? . J* U8 i$ ~9 U" C& T4 W/ y3 }
http://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html( s/ G" K& ?" Y$ A/ k0 O& m0 s- J+ G