脐带组织块贴壁法求助

湖南干细胞

谢谢各位指点。

湖南干细胞

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3 C7 @3 U" g8 H$ r  D+ c8 Z, S3 }2.26日做了一次组织块贴壁法培养，12小时后添加培养液时就基本上漂浮了，但是还是爬出来很多细胞，3.2日1/3量换液，拍照如上1。3月5日，3月5日镜下观察基本上没细胞了，只有碎片照片2，培养瓶里的组织块全部都漂浮，部分发黄，培养液颜色变得很淡，后2张照片所示。0 ~7 T1 W8 w; v. T. O1 e  E
这次本来爬出很多细胞，结果还是细胞死亡了，是不是培养液换得不够，细胞营养不足？

单个核细胞

  Z. V( \9 v7 z" H( L
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4 i! e9 ~# Z' r. ~6 M0 p
你确定有细胞从组织周围爬出吗？从你的描述以及照片加上时间推断，不大可能，你注意看一下是不是培养瓶底的东西，而不是你说的“爬出来很多细胞”。
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我这里附上一张组织周围爬出细胞的照片，如下图。
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老姜

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! J8 R4 e( G( J% Q. x照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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4 X! }, X+ }- |# F" d$ `照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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2 I+ a7 G) v  ~9 f' ]( Y照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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+ |) r7 u3 \, y0 a1 r" W8 h! A" m0 h3 N" x+ J; }; Z
43楼的细胞照片，梭形细胞长成大片了在右下角还见组织块了。你再细细琢磨琢磨。

湖南干细胞

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' o8 m* O" v5 Q+ k- u) X, l0 g
我的组织块贴壁不紧，9小时，第1次添加培养液时就基本上全飘了。后两张是爬出来的细胞，肯定不是皿底的东西，是爬出来的细胞，最一张是细胞碎解了。

湖南干细胞

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$ q+ h3 K5 h) J7 L3 I# F- `我的细胞基本上没有长成成纤维样的，但是瓶底用FBS铺了，确实是从贴壁9小时添加培养液时就有细胞爬出来，组织块贴壁不紧，常在第一次添加液体时就已经漂了，3-5天后换液细胞状态还可以，再过1、2天，细胞就碎了。是不是组织块贴壁不紧。

单个核细胞

- l* c; E" T) c6 h( L( q
& L) F, j, C: F  F
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' K6 D) w4 n6 P1 J0 F组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。! _5 ~! r+ P. _0 p. ?; h

" t) l' r( k. s5 ?3 q另，参考下面的链接：4 u/ o( m0 x) S* h0 u& _, o# Q/ Y  u
( W! x, O8 u4 Q) m6 ~" u
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
7 X: A$ t! w; B; U8 s2 D. Khttp://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020
& ^1 s$ c7 l! |& L% |% }请教华通氏胶的剥离：
( ^  U. K( \9 M, V, zhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html6 Q" B6 q& N8 m2 Q9 ]) ]/ e% a
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：$ _- j- g& D) |$ p# D! v
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
8 d) x! S5 U% a1 }8 d- z脐带间充质胶质的备置：& H( o+ M. f; [, L/ [6 u$ c6 o
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
6 E' i- b' F! _脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
2 o! S! |- u! V7 A4 j9 Uhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html9 V6 g) D1 d- e$ K: u3 E
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
- a8 Q, g, M1 {! b' M5 Fhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html2 H& g& D2 L" I4 D$ f7 T! U) |& @
各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗? 5 K4 K& r% Q4 E
http://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html( @6 X- S& S* Y0 j: m  x