无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

wy200616

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！

硕果累累_555

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。

qq348940434

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。
1 z+ y! ^* r! S/ |5 b2 h1 o  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？

570505

回复 wy200616 的帖子
% k6 Z* G, g& X+ E* O  P3 n/ \/ |2 |2 Y$ q
aggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。
$ ?& Z2 H8 V4 _9 e& c5 {7 }下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。% @" g$ u, k! Q: C/ f
                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。4 P. z4 g' Z& i7 ^1 q7 ]+ U
                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。
- J# S  T' g0 J1 A
6 {& g/ [. R! Y2 j0 _) Y; a7 ^8 Z/ p解答完毕。

qq348940434

回复 570505 的帖子
/ ~$ Q/ ]; G9 m' z/ G6 a$ x0 S1 c1 C
你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。

570505

回复 qq348940434 的帖子: k( y" [" H$ W7 u/ o- P, R

$ P/ O0 L  j; S那应该是细胞有污染了

mike19840320

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。

qq348940434

回复 570505 的帖子
1 t' s+ m  ^) }7 L6 G$ D. M3 |; w; w3 i( Y2 ^/ M7 H
没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。

qq348940434

回复 570505 的帖子
& e) Q2 I# A4 G
+ ~: t$ e3 _( Y( R6 I8 T( z请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。

xiaolong

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的