CIK细胞培养一周死亡

sdzhxq

回复 我是丁香 的帖子
6 ^) ]- J9 e- F
7 h( ]/ B/ r$ U6 K- a细胞没拍下来，新手刚做，一共做了3次，都是这样。能够分享您的经验？

lyj-0017

回复 sdzhxq 的帖子
# D+ Y: P: ^4 D% x4 Z0 j; q7 \2 i3 Q2 s5 d; q1 t
密度的问题论坛里都有，大家都是建议密度高一点会更好，你可以调到2试试，但相应的D1天可能会出现聚集现象更明显。细胞后期扩增过程中出现细胞集落是良好的生长过程。培养基一般都是商品化的，里面应该都是添加谷氨酰胺的。

hefan1234

回复 sdzhxq 的帖子; q0 Y1 U6 W0 A# l
; V" @1 I4 B& j# G4 E* L$ e
接种浓度有点低，你采血量多少，得到单个核多少，培养基中是否加自体血清了?

我是丁香

我们的经验，不管密度是多少，细胞都不至于会大量的死，最多是增殖差。“死”的含义是什么？溶解消失了？还是状态不好？

sdzhxq

回复 hefan1234 的帖子
, U2 ~7 N7 D( F% W3 w8 e; f; x' ^% w
我是用脐血培养的，50ml血，提取大约5x107个细胞，培养基加了50ml，没加自体血清，加上自体血清效果会好吗？血清怎么获取，里面含有抗凝剂呀？我们用的采血袋，里面抗凝剂是枸橼酸钠

sdzhxq

回复 我是丁香 的帖子
6 ~" K: M- p4 u1 Q1 E% w, a% Y. M
) v% H, o9 L: h+ x! {: g6 C# W: N* E增殖差，台盼蓝染色有很多死细胞，显微镜下看细胞感觉细胞不完整

hefan1234

回复 sdzhxq 的帖子
: f: N, X  h# C+ _6 O; u7 h9 @4 u* f
. I  n* z, I$ s( x+ G; @脐血培养CIK也做过，但没有出现过一周就死亡的现象。血清获得方法是将脐血2800rpm，10min离心，获得的上清56度水浴灭活，1500rpm，10min离心后取上清。我们实验室用的抗凝剂是肝素钠。

fenlichong

  T8 j; y2 T9 i  ^. m% [) r
2 U* a  F' Y' Z" Z5 F" G, t
最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

fenlichong

最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

heirrii

回复 sdzhxq 的帖子3 Z7 L  _# q1 O( M5 w
( t! J0 j2 n- S, Y- [
我们也是用的枸橼酸抗凝。你分单个核用ficoll吗，有没有洗涤干净。得到的细胞加入50ml培养基有点稀。