CIK细胞培养一周死亡

sdzhxq

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1 ~; h0 [) r7 {% `* K
) W3 I5 N1 ^1 I$ H+ t, O细胞没拍下来，新手刚做，一共做了3次，都是这样。能够分享您的经验？

lyj-0017

回复 sdzhxq 的帖子+ w7 n5 X1 M) C" r$ B
, w4 T; \4 K! b5 x7 l
密度的问题论坛里都有，大家都是建议密度高一点会更好，你可以调到2试试，但相应的D1天可能会出现聚集现象更明显。细胞后期扩增过程中出现细胞集落是良好的生长过程。培养基一般都是商品化的，里面应该都是添加谷氨酰胺的。

hefan1234

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0 P+ ^3 D0 M& ^9 Y3 E
- B2 x  \0 |" A: H; d接种浓度有点低，你采血量多少，得到单个核多少，培养基中是否加自体血清了?

我是丁香

我们的经验，不管密度是多少，细胞都不至于会大量的死，最多是增殖差。“死”的含义是什么？溶解消失了？还是状态不好？

sdzhxq

回复 hefan1234 的帖子# ?  E, H2 Q/ G- J2 W6 D# }
# u& w6 W: S( q; A4 E% w: q% l: S$ f* t
我是用脐血培养的，50ml血，提取大约5x107个细胞，培养基加了50ml，没加自体血清，加上自体血清效果会好吗？血清怎么获取，里面含有抗凝剂呀？我们用的采血袋，里面抗凝剂是枸橼酸钠

sdzhxq

回复 我是丁香 的帖子$ u" _& M; X- V( Z; Y$ O9 a

+ [* A0 F9 B( f) |9 I0 L增殖差，台盼蓝染色有很多死细胞，显微镜下看细胞感觉细胞不完整

hefan1234

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$ u2 h* V) h/ G" b' A3 w% E1 }
; V1 F, s# c7 B3 t! T3 b7 ~脐血培养CIK也做过，但没有出现过一周就死亡的现象。血清获得方法是将脐血2800rpm，10min离心，获得的上清56度水浴灭活，1500rpm，10min离心后取上清。我们实验室用的抗凝剂是肝素钠。

fenlichong

1 a$ D1 I( Q1 b
. V* G# Q  S! ]; S: `" \8 ]  R% M最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

fenlichong

最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

heirrii

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) S0 j$ O, C& G4 X* d3 z我们也是用的枸橼酸抗凝。你分单个核用ficoll吗，有没有洗涤干净。得到的细胞加入50ml培养基有点稀。