造血干细胞流式检测结果分析

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- z" t% G! \" G& [, F这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

nailute1985

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6 C7 Q% U. j3 R$ [: u& S( [* t0 ~! v" U" d
对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

nailute1985

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  J: }: R" z) @! a+ C( ?+ w
2 K9 p  s* z7 d, f- i5 U你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

SKC-SFC

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: f6 X. I5 O) y
4 Y) c9 \6 `5 z& R8 `好的，谢谢！您的意思就是：. m4 l( u- ]5 f! Q/ {* m: T  N
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体$ S$ f: x5 ^7 A7 }% ~
2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
$ L" J) C9 _; U  p/ d6 W3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

SKC-SFC

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- G  c5 m9 g, B8 \* R. E* w, K% H
9 H0 q4 h6 Y( L) a- ]& G! C我想了一下应该是这样：
, M( {+ Z, w. C! `0 W1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,
: z9 V0 v/ I  m# r: R# N" h2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
7 |( K* k6 S% T0 U: t0 K8 P( z/ Z3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推" O5 F' z0 u$ H3 X" f. Y4 ~
4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。% l2 H8 |' w$ j+ z/ b' {
5.检测样品管，并分析.

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子0 H; V' r7 ]$ l( |- b, \

; y/ z) g# H7 P2 B6 i& N是这的没错

nailute1985

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8 x- B0 w& ?+ u& o3 p  n十字门不需要的～你这个是逻辑门，例如：只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了

SKC-SFC

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: N  _) D- r+ R6 o3 O# x
5 W5 i% r5 W. ?1 b您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。
5 e* [0 D0 s6 B) T. E1 }1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？; h' o+ F7 ~4 t8 m
2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？8 D; q$ W/ p% r7 F# M; l1 k
3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

SKC-SFC

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' U  X% I( Y7 o, t, M- H, g" Q# ~( q' [1 K
R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.0 j+ j* C4 Q3 P' p5 O; u! F& b
多谢回答！

nailute1985

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  B$ [3 }. y4 y3 T6 J' K' w6 o
" e3 f4 v0 U' n+ O1、同型对照的门当然跟你cd34门是一样的 要不怎么叫做同性对照
, P' J0 [4 U/ L& `; C2、这个需要看你用的是什么荧光材料了……1、2、3、4四个通道的发散光谱是不一样的。3和4差的比较多那肯定就不需要补偿啊，1跟4差的少，光谱有重叠，那就需要补偿。7 T! W0 X' E. o) I( M3 I