造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

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4 A0 s/ C' L$ Y: r- F4 H$ N; S) T; Q  u7 e! f9 Y- N9 P1 o
这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

nailute1985

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6 J  z+ l' t5 M3 ~对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

nailute1985

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6 G7 U  v7 j8 r
你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

SKC-SFC

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3 u# v, e- W6 Z: _1 V' o  m
% |/ G: a7 W% V: Z6 i  [好的，谢谢！您的意思就是：
' n6 e3 d5 J6 U! o+ b% [  c" N1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
, X5 _& J" m  ?1 C2 Y' n# f: @# k( v2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。0 V/ o7 q: `$ u* M
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

SKC-SFC

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! ]' M: U2 Z& y' h$ l
9 w/ h- x" S" U# v我想了一下应该是这样：) T5 W8 V  a! C2 m) V, j+ j
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,5 E, w, |5 [* \2 c2 C
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
$ `+ ?9 l' i2 s; N2 m: d3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推
( m5 Q) J" M/ s4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。3 a- L$ r$ i0 L
5.检测样品管，并分析.

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子1 F* _) q$ e( y0 n

% [8 B; m  p1 P3 m# Y1 D8 K; T是这的没错

nailute1985

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! o; ~& P# k! {7 z9 ]0 D  Z7 {* P, D) B
十字门不需要的～你这个是逻辑门，例如：只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子3 I8 e: Q% H! R8 \3 X& v
+ \  Q( i0 |( V- G
您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。2 J' D* Y8 j  w& F2 S: B
1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？
4 y* B5 b) `, m6 r2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？
7 C) c" U4 J+ U8 S% D3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

SKC-SFC

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! J0 t% m/ f, |) Y. i* j2 ^
) f; G& e8 g& s9 x- A9 N2 GR4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.
! d/ p, A! ~$ k多谢回答！

nailute1985

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0 K5 z9 d4 ^6 E% n
1、同型对照的门当然跟你cd34门是一样的 要不怎么叫做同性对照: x$ ?; L/ p/ r6 [) m
2、这个需要看你用的是什么荧光材料了……1、2、3、4四个通道的发散光谱是不一样的。3和4差的比较多那肯定就不需要补偿啊，1跟4差的少，光谱有重叠，那就需要补偿。0 a5 o' S" K9 a! j. d. w; U1 S, q