造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

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' n# d9 g- r1 J3 b& p) s. F- a. S& Z
: q1 r$ ?( m# m; N, W+ G这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子3 p9 ]5 }, n! n, Y, X
0 d7 c, t* M0 x2 {
对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

nailute1985

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# e/ A, d  X# Y5 f  W: q: Z
你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

SKC-SFC

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5 l7 r8 @7 z' F: ~7 ~6 B! w好的，谢谢！您的意思就是：6 B# @( ]( O, y8 [, |% m; }
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
" y) m0 @, D5 J( i2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
1 Q. d/ f2 w* `9 t" t7 \( g4 \3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

SKC-SFC

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; @0 q/ x3 l9 Q! V) ^+ ~7 t& J; ~) o我想了一下应该是这样：
# j5 K. D5 Q+ i2 \' Q1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,  c8 J. U9 B! J( f, A
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
' t: j, M( a4 ]( U8 `3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推/ T  A& x8 \5 i" v/ e, O3 E+ u# P
4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
5 O0 R( D; |  i/ B5.检测样品管，并分析.

nailute1985

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7 ^- S2 a5 ~( T; `
( [) P' V+ V4 Z% e8 r! V是这的没错

nailute1985

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" X0 V8 `. e7 X9 G( I3 f: E十字门不需要的～你这个是逻辑门，例如：只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子5 Z" H7 `, m+ L& \

( \# [2 o- b" Z$ B* E. b您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。& Y; X  k  z. |. y0 C; W
1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？" Z' c% ?+ b1 X  i# L
2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？: C+ h6 v1 ?3 _3 A5 x9 B7 W. C
3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

SKC-SFC

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- ~6 \  P$ ?, j6 N7 h- p* [, ]. y1 [- Z7 k1 I
R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.
' n2 h  ^6 {( r0 ~' t  q7 I# V多谢回答！

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子9 }3 _5 }( Y7 x! z; p4 F7 [$ G
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1、同型对照的门当然跟你cd34门是一样的 要不怎么叫做同性对照
! H& P1 `: C: h8 r0 T" Y/ U2、这个需要看你用的是什么荧光材料了……1、2、3、4四个通道的发散光谱是不一样的。3和4差的比较多那肯定就不需要补偿啊，1跟4差的少，光谱有重叠，那就需要补偿。
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