造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

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3 `- P2 H0 ^. Y
! G; N3 v: m( e: b4 g这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

nailute1985

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3 O, X! T* }2 h# M8 J2 P
' \: t' r" O/ z6 e. X对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子: O: ?0 N* [5 r+ R0 y

0 O0 Y0 M$ a5 s" L你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子. y) Q( c8 L9 u4 {$ G2 e

. V  y. T5 ?2 P0 U$ Q! H好的，谢谢！您的意思就是：
/ E% m( m' a# X5 E4 }/ w1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
" s- e' G5 C& j. P2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。9 m+ U8 f: z2 v+ ~# L0 I& j
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子+ Q2 [" d5 d3 a9 E" H* a5 W

: O/ s' x, |4 Q/ I  W2 t) W我想了一下应该是这样：
$ a% Y+ ?+ E( p2 D1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,
6 {. O: o+ R/ v# g/ l2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体2 t# t) r$ S& b6 }1 u7 B3 o+ n" h2 y6 n
3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推+ q3 G" V4 b, J0 C
4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
6 _+ l6 v- W" @. l# |5.检测样品管，并分析.

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子- @8 D) p9 M: o2 `% p+ O% a

+ R; q" ^3 J4 T. o. A8 A是这的没错

nailute1985

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6 w" r+ Q2 y1 W, H% K$ {" H: I4 m
6 j* X9 j, X1 B) n十字门不需要的～你这个是逻辑门，例如：只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子; h5 K! C! z  T  g# _
) j% _+ z+ I' d% I# a! N3 `
您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。; A) T/ E3 Y2 D8 j4 W7 {
1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？: t; s6 }$ Q$ g# Z, n/ I  U! n
2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？- p0 ?$ }( a+ S" n0 n
3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子& g, t5 ^* o4 d* p- a. Z6 T% I

0 n# }' c! q2 h4 P3 V6 |R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.* w. y! {" S1 O
多谢回答！

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子2 ~! m$ @( [' ?1 N0 k7 e

0 T0 \" J0 d7 O6 t6 s, z1、同型对照的门当然跟你cd34门是一样的 要不怎么叫做同性对照0 B% g  Q" _# P. m
2、这个需要看你用的是什么荧光材料了……1、2、3、4四个通道的发散光谱是不一样的。3和4差的比较多那肯定就不需要补偿啊，1跟4差的少，光谱有重叠，那就需要补偿。2 z$ F: q2 F& [9 j% C