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楼主: SKC-SFC
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造血干细胞流式检测结果分析     [复制链接]

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发表于 2015-6-9 10:54 |只看该作者
回复 nailute1985 的帖子. ^8 v2 D5 O8 s: u1 N0 ~0 c8 }

! _7 K& @( R3 B- A这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候,基本就不做补偿,直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低,必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照(阴性对照)去调补偿之后,再测定单个的项目?
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发表于 2015-6-9 13:41 |只看该作者
回复 SKC-SFC 的帖子, r, z. f* V) c) m3 B
+ L1 T, I/ `7 i, }1 C
对 你是fitc跟pe吗?那你第四个不用调 123都需要
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发表于 2015-6-9 13:42 |只看该作者
回复 SKC-SFC 的帖子; ^; O: s- Q& h: n$ g! ?9 @
, t- ?2 i& d7 E) j& x
你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的,所以阴性管你就不需要再调了对不?
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发表于 2015-6-9 14:41 |只看该作者
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0 ^$ B% i) N0 c$ i6 i" v* Q. o
5 k* b6 r  b% I. _- \6 @0 [" J好的,谢谢!您的意思就是:. T4 ]. C+ h. n- x
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
. P5 F- `% D  R1 b, X2.测定对照管,根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。! n. M0 V1 \! c( Q) \
3.检测样品管,画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2,FL2/FL4,FL1/FL4的十字图吗?
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发表于 2015-6-9 15:00 |只看该作者
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4 y0 k( m1 I0 i, }$ a& ?
/ v9 l9 p0 c! c% F$ {我想了一下应该是这样:
% [# s% Z7 D$ |( N8 A$ p1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,0 m/ s4 l& B2 q9 F
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
, O- T& G. r+ J# l/ n0 Q3.补偿调整管:需要3管,一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体,以此类推
. h5 y, u5 s* x) D6 G+ j" I4.根据检测情况调补偿,调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
' x- S/ w* A# I( U5.检测样品管,并分析.
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发表于 2015-6-9 16:21 |只看该作者
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  a3 x/ ^- B8 _; U! \* y" [5 ]" y2 X2 {% }
是这的没错

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发表于 2015-6-9 16:21 |只看该作者
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2 m6 G, U: d, V% v; Y1 {# J( C4 L2 D2 y7 ]" U
十字门不需要的~你这个是逻辑门,例如:只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了
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发表于 2015-7-3 09:55 |只看该作者
回复 nailute1985 的帖子) c2 h+ v% f( ~# J( ]  N3 n. }

' c6 V' I% r* {( U! r& x& ~您好,最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。, {4 h( x9 W* n4 C0 d# U
1.在检测同型对照的时候,是需要先划门吧?这个门怎么划?
4 o" S8 @5 a% f4 ]: R2.在调补偿的时候,为什么3和4通道的荧光没有干扰,不需要调整呢?而1和4通道反而需要做出调整呢?% g8 ]/ G" c; M9 Z9 ]( J
3.我看文献上说,逻辑门R4显示出来后,还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的?
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发表于 2015-7-3 10:00 |只看该作者
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, r! F# H  C3 e; p! I5 z7 Q
' U5 s  B  A  a& C7 M# N3 nR4门比较宽,说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群,然后设为R5,然后重新简历FSC/SSC散点图,把R4门复制到此图中,并显示R5,说门划到SSC最低和FSC在100的位置,这个200是左边起还是右边止呢?但得到的结果15%以上,这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强./ E$ _' t" s3 S* B9 W$ G# O
多谢回答!
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发表于 2015-7-3 16:55 |只看该作者
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8 R3 r! ~7 _: R) _6 t) c- T# s! i1 s
1、同型对照的门当然跟你cd34门是一样的 要不怎么叫做同性对照
5 Q% S( ~2 x0 @/ X2、这个需要看你用的是什么荧光材料了……1、2、3、4四个通道的发散光谱是不一样的。3和4差的比较多那肯定就不需要补偿啊,1跟4差的少,光谱有重叠,那就需要补偿。
* K8 [# v7 V; S
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