细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

$ d- W6 j0 H, p9 y" L# `
% l) C3 b* h9 ^6 f! l) V4 C这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

, G: ~5 H5 ^3 m( @" f9 u- ^
0 G/ C# q/ k5 l$ y8 B8 k回复 guanjun1314 的帖子
$ H# m8 v" H/ ?/ U. F) w+ `
0 y2 L& a" m* ?- O; m细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
7 D8 W) S, l. r: R0 q% |' e另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
6 K8 j% }1 O  p% u8 X6 n

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
5 k- z" r6 q) ^* {8 G
6 t9 T: t. i* `& l/ s+ c+ h感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子+ _# g' i/ V* T+ W# P# V

; R9 A9 c, `' v以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子5 y+ U% K! V& b: f+ B! u# q
- h* L% W) v. c/ C# ^
嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子" m# P5 B/ b! y, g
7 F* w/ h$ T. Q: a
非常感谢

海南小石

. F. \4 `  S! C7 Q  w+ w5 S: `8 z% B5 w4 C1 H
有一个相关的，希望对你有帮助, t1 I' Q6 \) P  d: q
一、目的
% Y) ?; N  ~6 J0 F& I5 q6 Z$ m) e+ b0 @
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
6 V# Q# U$ w# h1 h( l# S( o, ~5 u$ z, M1 g2 A" i) p4 s0 B
二、适用范围6 o8 u" e0 s* l" w4 h
6 d6 m4 [- h# Q; u
适用于疾控中心所有技术人员 。/ P1 S! _! X7 f! J8 _# k, `

+ ]" U  s- Q$ x' K- G8 n三、程序
& G$ s( E% q( D% B0 g  D- P: Q3 j8 d% A' Y- K9 D+ Y& M+ c
（一）生物安全要求, ~  H* d6 k; ?; M
+ \* \2 C( g8 w( u+ P, Z$ I# o" y, H
实验室生物安全级别：BSL-14 ]$ h( K6 B2 M' S7 A9 `. P: m" _
, W" q0 \- P0 T; X* w5 l6 B
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。; Y% t* Y1 l' E  R  r9 }1 ?. X# ~
' P! U* |2 J# Q4 e8 `
（二）材料/ U1 c9 k/ s" X; {/ {2 [& Z
- b* M% a; }  L: \) Y
1. 生长成片的MDCK细胞, U% `) A  p* W9 k) t

9 @6 S) r, h5 k8 j9 ?0 K! K2. 无菌的T25细胞培养瓶
: x, W/ ]5 O3 J- }
& G! m) k  Y+ I. P/ Y# O( n9 {3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）9 j  l# S$ D) j: |" ]: v+ A

  J. m  z: J& i3 r% a1 m4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
* ]5 \. s# C+ m6 C% ?% g* u7 D) o" V/ Q2 O, e5 |7 g+ n
5. HEPES缓冲液，1M母液4 L0 U. W  T/ Y+ [
/ H6 F7 z5 ^, ?3 h* }) z
6. 胎牛血清' Y  j+ Z  ]$ r5 D2 ^

5 U# N( P( c1 K  J4 K5 i7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃, z& M" ?7 e/ B2 s' ]) s- v3 K# s
# K! E5 a8 ~5 U' T2 V8 R
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
+ t" w, Y2 b3 c$ M
. M0 _' _5 T/ R# C* F% H3 N4 L9. 1mL、10mL无菌移液管2 A; J3 b; `' I# C- A. b* l' \

+ a, {! ~6 {- H/ i0 x10. 70％～75％的酒精
/ j& G$ [9 f& a; z" H( X- \4 y- ]# J  T/ ?+ m3 k4 K
注意事项：经常检查试剂使用的有效期。* y8 a7 Y5 l6 x5 Y) G
7 _4 U* G  ?6 N+ p, r4 t
（三）实验步骤6 M  p+ M  d* _( Q7 C- i
1 J* h7 D( l4 R( v
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。- i+ W9 R6 L+ O2 Q" \* g
4 I* K4 O6 z+ K, s' v; Y3 b
1. D-MEM培养液的准备) A/ q$ `( ^- {. c1 M  b# C0 }/ L
* o: `/ I. W+ C. M2 \
500mL D-MEM液中加入：
: J' M# _) ~/ S9 L
/ T/ K% ~# s' M+ X' p* l( G青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），% B4 k9 z) \+ z
3 T# v5 T8 V, R- ~
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。4 x' Q7 `" H. T" I

# d3 e0 Z! D7 ?6 M7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL " o# c- g- T( w8 T, o+ h
# a7 `0 n4 H, z( m
2. 细胞生长液的准备
8 I- S- x; K$ J; [$ v3 i2 P6 F/ O+ D* @# ]# R
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。2 Z4 D7 h0 i: J  B7 F% Z

( Z& t  Q  s* U, B: H6 p3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。. _# E- |% b( E. }

( K8 U- b7 B: G' D( O( O8 f: w- N' H4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。' {2 w, m2 S$ _- ^! |3 }) b/ `
7 ^5 B4 f& l3 R" `
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。& T; T3 t. z$ |

7 E1 k, `0 Q- A/ w  ~6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。7 y2 `5 a) @, E6 K4 k

$ s1 s0 ~) S/ b% r7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
% d& u) ?, D0 |  x' B" J6 ]. A- j2 t& g' C$ z4 {/ ]" f
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）
+ r: ^$ s8 B6 O, Z1 X
/ W& ]4 B; T* {9 x0 B! U# w9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
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10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。* |3 l8 Z/ j6 N; ~+ y; o# I

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢