细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

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$ J; |; s! B- S& [- ~7 ?! s; o这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

, N& s1 I9 o$ [) ?( H4 ~

9 ~6 D) J& H0 r# p) I回复 guanjun1314 的帖子7 j8 K8 _7 Q. G9 r8 q

8 c  A9 V) v. {5 d0 \. O" M细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
! @) q% a7 x+ {$ Z另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。+ p0 e. |, C1 ]' a' |0 f" g+ s8 U$ O

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
, b2 f* Z3 {4 b$ v% h8 Q; F0 H
. e" \+ ^% ~: [: x2 L感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子9 P( }( D, F# C& H  S% X& u
! R3 O+ T' ?0 s5 z1 S+ d
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

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  V5 Z/ ~# [# T
& D$ m/ S" B/ Z$ y嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子% e% ]& ~" m) n  {8 ~; r* k

4 W7 l: M! ~# p+ [4 C非常感谢

海南小石

  A8 D( t  e- a% [/ {5 u
  B, W4 D4 `5 u" n% s: h# L有一个相关的，希望对你有帮助
7 e# k7 H; j, e7 h3 A" k( d% D一、目的8 F% r' F6 w0 G# N0 j  i
9 ?6 f4 X! F( ?# b
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。9 ~6 [+ z- f& v! w/ u2 R

; C$ P* S# |8 i# x1 A二、适用范围) N6 y8 S2 ^( D" A7 }# g

0 p3 M6 a( {- h! e3 m适用于疾控中心所有技术人员 。
+ o* p0 L6 {- d, N' s" t/ f' F& c; {6 k" t! @3 \
三、程序0 e. k  V4 x/ d
# [. n" ]; I: J4 b$ e' t
（一）生物安全要求
( `% P( ?  d0 F0 I( Z
% Y! S" g9 f  q$ ?" v, c# h实验室生物安全级别：BSL-1* f  M: k% y  x7 @) x2 v9 O. d
( Y+ G0 c# Q7 ]! x
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。4 B* L: Q/ E& e7 `3 s
6 _2 g$ M$ C$ `  `8 z: f' s8 {5 C
（二）材料
  y* a3 |3 x$ W7 m) {  D" }% r) j  x4 V2 V
1. 生长成片的MDCK细胞, j0 n; z$ z8 \# X- s9 U
2 q0 z" i" y8 ~8 s+ a/ n) n
2. 无菌的T25细胞培养瓶
+ C" `/ |) i% m" ]5 d/ {) M" O( r+ M
3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）. {' f( y# l0 T  n

- B/ M! O; g% D8 c0 u. x* P) n4 e4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃% N! [  f8 e% K! [$ G  D0 v
0 w3 h8 n, i" z0 q4 D
5. HEPES缓冲液，1M母液
2 Y, e/ }& `! ?7 o8 i8 t! A" h2 \# B& x
6. 胎牛血清2 i0 J' i! N8 y$ D, r+ h% G

0 N+ S# `: H" w$ h) F2 \* X7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
+ P8 O5 G; `+ ^0 W
  t$ H: f9 k$ ^8 l* I8. 7.5%牛血清白蛋白组分V: Q3 O, `% n' D5 D$ _  \9 I

  _) P& @3 {2 z- ?0 j& x9. 1mL、10mL无菌移液管- ^* h7 e1 A  z% g/ P8 |
) y' o5 r1 y1 C
10. 70％～75％的酒精: l5 [2 x1 z$ X6 t

* Z) ?/ n% Q- B7 H% P$ N注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
0 h; D8 h7 z% @' L. V2 u8 x% t8 \5 H2 b" V, e) j9 _2 {' G2 R
（三）实验步骤& S) V( Y  [8 _% f1 D

8 n; [5 N. J+ y- d# u这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。4 e: A+ w0 b( m& L1 K
  a3 o$ w# M6 I" S
1. D-MEM培养液的准备8 o5 `: `+ S9 p8 b. W& g5 A7 q

+ \3 T1 Q4 I" }; [! G500mL D-MEM液中加入：8 i1 i: P. I4 K. k! r2 f

& z1 B1 ^! J9 Q% T青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
1 J# k+ t+ n% x+ }! J5 Z4 L+ m( j5 j
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
) Y+ E& H2 j+ n$ S  q) T
2 t$ J; [9 a* m  f0 V& o7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL 3 a8 d) `; d! M4 O4 V6 p$ V
$ W4 L% y/ S! O
2. 细胞生长液的准备! ^6 J2 |! N( Y. c" D" a

( j4 ?$ L" D6 N1 p$ D) @' l胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
# y2 P8 E- q0 v; ?- D0 B9 J' B0 k% T% g" J3 S. C
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。
5 N  k- }( W2 C' y) m& P
- ^5 o# y" r% t. l- I  G8 J: ~* E4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
( d; G6 K. J. T' F8 T, g
; z+ n! u1 ^; H8 O* ]) G) Y. r5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
; r: o' j% J2 ^1 @, f5 ]$ P
. {, `$ i, m  U  w# M" w, d+ n6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
8 @0 K2 e" S" Z; r' ?# \2 S" M9 i+ x9 T9 N
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
& V9 c0 h' F% O; O2 H
  H: v3 b+ J  b2 o8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）) `3 j) W. C3 f2 u+ J- J
: d0 W- X( J, U8 @  o: j
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
( F: \" G* W2 ]# h+ M  h  d$ P
: J. ~! X2 [" u: V  F8 S4 O( P& Z- {10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。
" p: y4 O3 @  A4 \! m

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢