细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

细胞海洋

回复 gyjjsw11333 的帖子7 b( c/ V7 p4 L* {
: @) p9 [) \% N% s0 }
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gyjjsw11333

为什么下载不了呢

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

海南小石

0 P/ `0 }0 @* R; ]% |: H$ Z0 o

# s7 C4 ~8 w& C1 U* K有一个相关的，希望对你有帮助
& \2 s  K2 ]- i0 w. ^" `% k- L一、目的6 G2 }6 ]4 J  c% y/ J0 k+ ~

$ j$ i3 @1 g9 u: R. }/ q. h. vMDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
( G  \5 A1 I* a4 h4 s$ j+ W3 f) j4 |  H  O: _, f$ K
二、适用范围6 ?5 Z9 K0 X- q! k
( |0 h5 }: O# _( ], B0 E; _
适用于疾控中心所有技术人员 。: P6 x, i8 O# ]# z0 c. s

: ]3 t9 y  _7 S/ B! Y三、程序  o0 Y8 V9 \+ w6 G, r6 N! L

( Z9 }5 P4 P3 v  k2 K（一）生物安全要求; U7 {% w/ T* ]+ |) k

" p( z7 O' Z9 _# {' ^8 Q% [; r; s* T实验室生物安全级别：BSL-1" ~, @4 d' \! d. d1 ?& K* U

* d* a0 J5 s6 p所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。  I& a* k+ k" e" I, T) [0 @

" v6 M$ ~1 z" ?! F8 @+ \（二）材料% ^. j, J6 G  z) o% B

1 w! s( ~3 U$ v$ N( f7 r8 x1. 生长成片的MDCK细胞# ~8 M7 s" d8 T+ ]2 d

6 V9 r' I( D& u2. 无菌的T25细胞培养瓶0 f) v6 t( R5 q

( {& x+ t7 N! k. T! p" x- c6 V3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）3 L0 D. q* ^+ W! V/ a, A

- }3 Z, Q! x& B/ X2 j4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃. I1 L3 n5 B( L3 R/ Q( A0 {
4 O6 \0 `+ A9 O3 F0 V
5. HEPES缓冲液，1M母液
! }& K/ w3 `6 h/ E1 E5 E& _  ?9 a+ j+ P
6. 胎牛血清
0 w# g8 f% O% w+ C) @
  g- c4 }% C9 D7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃/ _/ k$ v3 B  B' V3 N
* [9 t6 Y1 p$ i2 b- z  U& U8 n8 ?
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
) b: p% g+ n. z, d  P
5 b0 E( h' A& x5 a3 j6 @9. 1mL、10mL无菌移液管1 E0 T! f6 [& G6 \0 F
& d: L# G  n. W! w
10. 70％～75％的酒精
; u3 j" }# w: F, N, c; d7 V" |9 O5 z
1 K: n& X9 A; Q5 C# i注意事项：经常检查试剂使用的有效期。0 c( M7 x, n4 L0 `7 l7 v- j
, e+ b0 v3 V  h% K! R1 K
（三）实验步骤
" l9 h. C# X; |4 w: s
! C+ U- Y7 u8 p" X* T这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
* i. {; S, N$ z! D
9 O7 P/ o% {9 c6 S3 S4 R1. D-MEM培养液的准备$ M) n- Z1 ]2 z3 F; l

7 R* `1 u) \$ ?4 o500mL D-MEM液中加入：
4 n, J3 t( Q# H5 d% ~  Z' a+ k
4 q/ E& D: }' z) L, n青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
, r, V! S& Y. _; {( Z2 C( D5 c1 m# k" S( C  Q6 \. P
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。# Q0 V2 j1 j) A) u& j# M
# V. o2 \5 {4 K3 }
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL 4 l) v1 V) d6 N- L, E, U* F5 {

1 @  S0 x5 P/ m* Y' S0 B8 q2. 细胞生长液的准备
' u# ]4 E' F3 h8 Y. c. g$ |7 [5 x; N9 K7 M/ E0 b( Q
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。/ @& q1 r" s+ f
) i) h4 C5 U6 K; y6 Y
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。. N( M, u1 s0 a# X) O
: j9 H# A" F' H6 D$ `# i# n
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。0 j, c; S! ~; l+ @" p3 x% f' d
/ N# ?& s; W3 |; n& n+ S# I
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
1 E+ i+ c  Z+ _# c: F8 t( z3 h( x0 Z
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。4 \8 y4 y. |; [2 n; W/ M

$ D0 h4 j) d4 E7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。3 R0 l: Z* z* R
/ y. B0 |; X- X
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）  }) ~, Q0 s* z( {" M

0 P" l5 h) Y0 q! X9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
& f$ l, `2 C( r9 |# p0 T" \1 D5 X: S1 M" k, d% F+ v
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。  l9 v$ L$ ~$ H2 I1 i. Z7 H6 B

guanjun1314

回复 plum 的帖子+ M* C1 e) o. J/ ?
) O8 B5 e+ v# ^. d$ J
非常感谢

guanjun1314

回复 yooung 的帖子1 |% I( p' x3 r# u( K
0 E( ~8 V3 x6 c
嗯，建议得好，采纳

yooung

回复 guanjun1314 的帖子! q: l! Y: f6 w" |% ~

8 f) q+ G2 V6 }$ }  p9 t以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
5 T5 {" Q7 o6 c' K' N  h& b& l: x" j' F& x8 i( m
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

4 X6 \9 _0 L! Y, k+ Q4 C, a* Q, d7 c3 L4 g
回复 guanjun1314 的帖子/ [& N( B# ~% b( T6 o; ]
  \( p7 K2 x6 V0 i
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
  o9 [' C3 n. F' i7 D, I另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
# u' q6 a0 K% v4 r% l) T