从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？! A4 N& D  h5 }% d# S3 @* D
第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图
! j/ b* u6 o9 t7 R平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。, Q$ N! p* z# u- [, e3 ^
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

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3 j, f# r5 F- N9 c7 P- {. x
5 \+ w$ N# L1 g" s# A; U7 Y  ]我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

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4 ?, }: E. Y/ u) e0 w, L: t, ?7 O  l9 @  G; J
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

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) H+ U4 ?5 j/ @; ^2 k3 ^6 i- I
$ @. A$ V$ a) J8 H% O研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

回复 momoenn 的帖子) C. M6 A2 S9 P! Q: r3 g

+ V, d+ l: k, r9 U! h总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～2 H" W* `6 V/ l5 d  u
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了
, _8 d4 L2 @' x1 ^BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

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- x* V9 o) y& Q( J# ]* Q5 ?9 O# M* G4 r! z- D2 i$ q: J
中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

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. }# g* Z5 U  p3 {3 s, F
$ o; K  I7 [5 v昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原