定量试验扩增曲线?

gxbzjznn

同一个基因做了两次定量试验，但扩增曲线为什么差别这么大？哪个好？

gxbzjznn

这是第一做的（用的SYBR酶）

gxbzjznn

这是第二次做的 用的2X Realtime PCR Master Mix做的

wuhuaguo88l

用染料法做QPCR，需要看溶解曲线，你是绝对定量还是相对定量，实验目的是确定基因的拷贝数还是表达量，没有交代清楚

sithbj

同上，对照那???

gxbzjznn

回复 wuhuaguo88l 的帖子! ^- {/ V9 Q! D" T$ f: Y# a

7 H. D7 B" M0 O8 q2 g0 u2 S相对定量  看基因表达量  内参和溶解曲线没放上来

gxbzjznn

回复 sithbj 的帖子
$ v" U; Q$ b4 ?: y/ Z/ `+ w2 d& H4 t- \( V
相对定量  看基因表达量  内参和溶解曲线没放上来  我主要想问的是单独从扩增曲线能否看出来扩增效果的好坏？因为试剂商跟我说的是2X Realtime PCR Master Mix是他们从美国哈佛大学实验室分装过来的，效果非常好。。。

gxbzjznn

这是第一次做的熔解曲线

gxbzjznn

回复 gxbzjznn 的帖子9 t5 i( Y3 w/ E- i, N
  B, \9 T" u2 l, D8 ^
这是第一次做的溶解曲线 第二次做因为是新的试剂（2X) 由于说明书没看明白 可能程序设置错了 只跑出来扩增曲线 没跑出来溶解曲线

sithbj

首先2X的效率低了好多数量级。如果条件类似的话，这是一个失败的反应。实验中可能有一个致命的错误。首先2X，是最后加完引物，样本和水后，正好是1X。其次别忘了引物。第三，这个Dye是什麽，波长要对应。: K% r8 [4 b8 Y6 y$ f- f5 ]4 k
# s' ]5 x, K. a$ p- R' l
英雄重来一遍吧5 I! G; b) j9 x% f$ \5 z; L9 d  C