小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
* ?  e0 W$ e) i( |: t; s2 Z( r2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
7 A3 Q9 K4 v/ m$ H- V3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min( O9 O" V( X- e8 P' @. A
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。9 U9 y- \9 c! N4 p
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
0 t" ]2 ?: Y5 q. {+ ?  j; p6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
) V# J$ {* q9 \4 l" z9 m今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
2 P4 D/ N  l" p1 k此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
9 p2 p) t* k3 A- k  [0 w你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
. i/ k9 B4 ?1 q* K

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
/ Z+ g: \+ A6 U2 m- U& c: p& i" ]* A. j7 P- |+ v
  ^/ O7 r5 g! W1 I3 {$ l
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：* x8 t3 |# ?9 P1 B

2 u7 Y) X4 \( z% b1 d1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
' \$ i+ f" ?# ~* Y1 ~0 |. a! {0 O- q+ Y# G
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。0 {: k# |3 }: f/ J7 S
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
5 G& Q0 h9 L+ K+ [& g/ n1 [4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
2 x; a/ M7 w* M/ ?! Y
! k, }2 {5 ]) r# x' \7 Q8 X6 N" a/ v) B
    这是原代细胞吗