小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。' f$ Q) w  [  h  f9 ]; x
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。1 s. T- W' w" ~9 B4 y
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
, N8 j+ @1 h2 j9 ~4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
0 Y# w2 m) c/ w6 B' P: I5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清" X5 S+ n: ?: U& p5 Z) S( M& `* L
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
8 |* g. Y! n& J; @; x; r* }今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
, z4 _5 u. \! F% n) d  ~% O0 ?8 ?. N' u此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
' k5 z' a% _; j. `你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
4 X4 G5 G( d- s9 M$ Q9 O; C

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 5 C$ Q' x- E1 E8 y. r
! K: h6 [: x) E! K
9 t" {8 x0 @4 F. n2 K
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
/ L  R9 B0 \+ b' ^% N4 C9 B/ e- F( Q9 i, ?. x
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊# I( {9 f) v1 R7 J: p5 a. n
4 u& U( k- G. V+ w1 R: i0 y+ c
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。3 J! b& W. `6 y
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻4 }! Y( |' n7 l, P, z. Z
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
$ E& s6 u) m: C! t1 K8 N: y$ R; G; W! c' X$ R

1 T1 l/ ~/ b0 E4 U" z9 p4 i# v9 I    这是原代细胞吗