小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
) l) |5 y7 {# o, y0 S2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。" u+ o3 l- f2 M+ c# D, q
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min/ j0 \8 k5 ?; j9 Z3 F$ Z5 j& n
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
. }6 `5 @- a5 A) ]5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
3 h6 S: S1 i/ @( d' X) K" J6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。3 E: R! j! a! t+ ]# H1 J) v
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
" C  t. m0 m) t) S/ Z此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的! ]( w$ ~  j6 z8 X7 S+ X$ u8 i
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的3 a* W/ ]* K+ ?& _$ @# V$ m

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 8 w2 \* T- z9 C
$ S! w% M/ I" o0 p3 N

- p6 D5 y3 o3 d+ X    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
+ I0 V7 K8 [0 Q  Z9 ~
  t2 b3 H5 e' i2 p3 t- z0 w1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊4 g3 X9 `: U: ~
+ Y- n/ Y0 U- b9 |2 K
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
, U+ \, F" n5 h( ~3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻" Q# _! B$ n5 G* N. Y) z
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
" Y8 u0 N; |, g' b: b& k, o# F, k4 l" |+ t9 r

# D2 f" ]( L; n- F0 o8 U    这是原代细胞吗