小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。8 N& C$ |9 o% y. y
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。5 l4 P/ X( f: l9 D- c
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min1 G8 q! M1 }+ V( W4 v; V* m# f
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
, j0 e! i" U: w8 {: a9 r5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清( Y) b/ x3 t2 N3 {$ i' m
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
& h, ^1 |9 d, a6 h今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
; M6 x, L8 ^; X: H5 E% ^此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
8 x: \1 }- t' `( ^你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的2 n* t0 y# a. v

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
) b1 J9 V- v; w1 n( r* p; f
0 ~3 y5 P4 v1 ^9 N0 \4 {! d% g6 h
' x) \5 |# @, W3 R    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
0 {  c6 R9 j! Q
& j* X4 p" C" n5 o. s8 J1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊* v. M: B8 n! d, D* f9 \
  r$ C: k( R' C0 C" _) x
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。& ^  I. _1 g5 U2 i/ F" v
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
0 f2 z) n3 K8 D$ h, g4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 2 z! Z+ H% k8 p! F8 g7 @6 E3 r, w

4 o0 \! s- T3 Q- F/ F+ G6 y3 M  {- k1 h8 Y+ w6 b
    这是原代细胞吗