小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
. p% s" G' l5 g3 B- _2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
2 N+ ], e6 \$ \% M2 o& J) J3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min# b- e* X$ V  Y
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。- m2 L6 m: F$ ~5 J1 D6 I! R- z5 m0 L
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清- F3 F; l& M+ B' j3 W. `- {
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
4 E: k  S5 |2 {9 d7 {, @- M今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。# v5 C- j. v- ]7 V( p7 ?
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
  S: s- E, R8 V3 l6 N你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
8 x6 k8 _! D; S7 G& A3 C& a* W, H

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
, h* W; y' x0 B" L& a
' \  V9 {, |; w- ^1 z3 G# k' \- C# |( T. }9 q& L# [1 e$ D
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：# H1 d% y- K, D9 W

% n" D: p+ B+ [/ g1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊3 L# c* j/ n) |
( \! m/ h7 E. L+ N! o& ~! T. q  b' J
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
' P( y) T2 j$ N% O0 w3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻4 S* J/ \' `' x4 Z: ?
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 / |9 i% a2 q$ Z1 `; ?, ?) w4 e' ~# D  A

3 _5 C+ U. c# n; ~* P+ i& _$ |1 I; c3 o
    这是原代细胞吗