小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
( q/ z& s. ~! F2 `3 e2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
9 l' O5 Y4 _- n" g& s& u$ `3 t3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min* [% u9 a- _4 a: l9 |# k, ^; Q
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。6 g# z9 z' N! X) P
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
5 |, b- c( c& t1 S- E3 ]6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。$ V" G* j  Z" W+ e& V6 X: I% i
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
# c! A4 w) v) o. U* @此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
! s1 w7 g8 R4 p& J你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的# h# l4 l* h! N* V8 R4 ?! T8 T# m

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
. q0 V" k3 K9 V5 q; j
; y) [* w  l0 y  q+ O: C, T5 D4 e
5 r0 C5 M6 Q/ M- t0 u2 t! H    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
' H( x* u% b+ j/ Z; D" w4 C* a
+ T6 Y  A1 P' W, E- }1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
. C5 [6 k% Q+ e& O) i4 m3 l
6 A9 o' T; ?$ J, \. T2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
& b' V/ _1 P  s7 t3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
- |8 ^* H5 O4 {; z4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 ; F3 T! _; k* r% t/ b

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7 m4 N+ p% U' l' h0 `! A    这是原代细胞吗