小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。4 W0 S1 y3 Q' ?- r
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
" A4 x  {7 W( h/ W. K3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
* K) K; b; O) Q2 X$ J1 D- W4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
5 [1 ]5 E1 |( r! a5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
% G& P3 g' C8 a% \# }3 D: ^: J6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
- S; c& q7 u# G$ `& [3 t今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
! d; Y& }6 s/ ^. N此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
+ I$ O9 O; G+ Q1 T4 M9 \5 [你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
! A" n8 y+ ~, I" C1 V( i

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 0 n6 U% q$ i4 f. R  C$ C

+ L0 L+ g2 B+ O( }. J! Q% c
( u2 T4 Y6 }8 l    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
1 A1 r6 `1 u0 w' }. t! a( V3 \5 X  L! N! D0 P; y! Z3 K4 e
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
- ~* ?& @) @3 C) ?( k) _/ c- A/ V# H& c: p4 ]9 {4 [
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。, |) M4 U4 i, w) n
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
% _' y" x/ e3 x4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 3 z5 {: ?* N" a; U8 s' s

" g5 k" n4 B! ?* U; M
+ F# A: j' K7 ?8 i- _3 A    这是原代细胞吗