小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
% o2 T+ ?5 p$ z$ q2 R6 ]2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。3 k3 s$ d: |) L: p9 m* C3 p7 N6 F
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min# U! n3 z! x" O" ~% J* U5 n3 o2 q
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。4 U6 }4 D9 _# ?% @7 E' m( R! G9 V1 {1 f
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
3 S* c; Q$ S2 _  f6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。6 B' i# D6 }! f( @$ v9 O: U- I5 b
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
- s( V. ^3 U9 s- R7 f- s0 D此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的! Q! e) [" \, d3 C7 L) h! }
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的  B/ L. t4 w9 @4 v1 i5 k( M0 F

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
0 f2 k" ^, i% b# s2 x% K" a' n( C% C" o- N
( v. e# v' h, }5 p
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：7 }: c9 x0 D* g4 B
6 J/ |8 p* b' `* V, Q+ W
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊7 l4 L# b- h7 r

- V7 x+ N! I" i2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。  I# D) r0 P- W
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
+ u8 N$ S/ B  Z0 F# ]" j0 H! o4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
" R1 A/ i  s0 _' D7 y# @5 j; K2 Q1 n5 @  [

8 ?. N) a: @$ {$ E" e, J7 l: C3 D8 Z    这是原代细胞吗