小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。) T( u& s, |& y1 K" q1 v
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
, p. Q: {7 D0 p( P9 A$ @3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
) K; ^6 F7 g/ k. K8 J4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。  R1 w' e4 w" ]8 @3 C# b$ Q  H
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清1 f, i; p% J6 S8 Q) [% y5 |" Y
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
- R, R  p( k2 ?, q今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。  w. D- {+ K1 q! G
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的; H  q0 A& ~$ E" I) e
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的! e; [) w5 |. b9 t% ]: z1 n

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 6 K) k/ T5 {4 m% z& ~% ~

0 I1 j+ @9 P2 ~( Q/ ?4 w5 F$ i0 E9 i$ }
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：3 h' Y3 i5 P( \, X. c( _
% Z& z  O5 e( s0 j9 Z
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊' y% J# c5 t; @3 h: y' N6 N9 y& g
! Y* k# c1 C8 g! E  \. S$ n! A
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。- ]$ i0 _5 K) j% p  w9 [
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
1 Z- M' m, o% |9 D* @4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
! A- t  A1 z; f' K
1 C2 X* V& R8 s( y: U  Q5 H/ g
5 D: ?0 Y2 D  }4 q' H    这是原代细胞吗