小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
% ^1 M) u! G0 S+ U: E8 X2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
8 _! M7 z( ?6 i3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
5 L. s/ `7 J/ |! X) G, O2 \& h4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
1 m, a8 A) c' }" L- F+ }6 ~  _% Q" p5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清0 w  {6 w, E+ _( ~+ j
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。2 A4 o0 W) y2 ]* C+ X# A* O8 D' {
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。9 V0 z& u0 Q" @! {' r
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
+ z6 s! i) n" \; O6 j* J1 E& {你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
1 i. Y: L0 d1 g% ~0 b) e; j

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 3 _+ Z/ V7 m) \+ P$ |9 O: G, \6 J9 S

  F8 z4 O6 I: t- ?5 R+ V
- S$ O6 ]) a/ x    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
% X) |2 w) ?; s+ m* w; f
$ l$ F8 ]" [( Y( |1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
. q( G- N9 v- V
1 [+ m3 q2 J- ]+ }2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。0 O+ ^' L; m- c( Q
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
# D2 y0 L* ~" g4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
) G. ^. C+ `+ D4 K; `! O5 n* c5 ~) C. I% ]' s# `1 ]  W
2 r: e& Q: G! J, e1 d
    这是原代细胞吗