小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
) B) @8 n) }% J( F# \% M( i8 L2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
% x. H( i( K/ B! O1 s/ T, Z3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
0 Q3 q; M. `) E5 v. R) k3 B4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。9 e% e8 t, \+ a/ P
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清$ s7 s' x2 @2 H% ?, R8 ]; Y# i
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。  a' A# q; I* Q5 O; _4 B* C
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
1 e8 L6 U* F. ~- I" ~  L5 o此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的( ?* f! r0 m" M, J3 t1 ~; d5 e" ~
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
. ^$ R5 p1 N4 T6 [" C: B& s- D9 h

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
3 L9 |3 f0 l9 b- [1 }9 r: w
7 {8 _1 ]* r/ ^
" z$ e  n) c- f* w2 n    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
& s. c* g; M+ c9 G  {! w& ^# J' q% F2 E* \7 q  S5 G
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
5 i9 L+ t2 N* o! Y5 I8 \8 p% D* p( [
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。7 Y$ F0 E3 i9 \2 i3 r
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
& J5 V% ^$ ]6 L4 A4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
/ _1 S8 Y! \) g% ^- u# k5 L0 _$ R" \- T# g2 B

$ k- u& p) [' N+ ^    这是原代细胞吗