小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。' T$ H2 o8 K- v4 l. M+ x* W+ B6 v
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。" i# c% h! g* e8 C& H. @9 n8 I
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min7 Q7 y; T9 N; ]5 T. \
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
& m8 T& ~$ ]( i5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清0 v8 v% e! z+ g, P& y% v
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
. L) a1 F  S2 P: W今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。2 v8 R3 k$ j+ n
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
" \" F( H8 l5 y; ]9 _; H你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的3 M* y) a: ]4 T( a( L: Q& y

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
/ f8 Y. U3 U  h, d
# ^: ~. [9 @, j
, [# p, m6 j, _8 L7 l    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：6 D5 k6 e  I; l" k

- C8 Z; v( T( A4 S0 C! R; l1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
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2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
! S' S; K3 O% U- W% h3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻% o# I0 M% M$ @8 j9 y' D. z* W& a
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
6 H; V, T/ t* Z! x+ ?7 x! A: V/ A: q1 k, P- q% J1 A4 E
" r* H& n. j7 b, D7 k, K
    这是原代细胞吗