贴壁培养神经干细胞

smkx

请问有没有人用贴壁培养的办法养NSC?% j. {" \. X) ^/ N' y* \% P
效果如何？

iseeyou1210

上周去uk开会听人说了,效果还不错,我正在要protocol.
# z% P2 \8 T  F, R1 L等等把.

smkx

回复 2# iseeyou1210
1 x; H) B  e; @3 K
! B2 r- Z9 C# B
4 n! V6 W/ y1 N$ z  V    好，等你好消息

深海寂寞鱼

to smkx兄：
9 U# B! Y  E. `' q) E
5 p" a2 Y. a* e( @; T- n8 i; z    贴壁培养神经干细胞效果十分不错，细胞的增殖状态要比悬浮的神经球培养好很多；
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# B4 o. ~4 J; Q" c; Z6 H4 S# [    而且未分化细胞的比例也高。
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9 A( ~- o1 u+ {    培养的方法和咱们通常用的方法大同小异。4 e- o, P+ Q2 \2 c

) f5 j& x) U& m: ~( }/ w    首先注意把培养皿／培养瓶要用Laminine包被好，通常是按1－2ug／cm2，37oC包被过夜。说明书上说的是包被3小时，但是包被过夜效果会很好。) |3 K9 q0 I2 {8 e# h

8 `. W0 i. X5 Q/ x- s& V5 c    ～～～～，不过Laminine可是相当贵的，每用一点点我都心疼不已。2 r/ P- G2 v1 k) N, O
; V% t7 |  Z' z5 A5 O2 _1 Q: Z9 q# E
    其次，这个方法最初作者的培养基里N2是自己配制的，提高了N2里每个组分的浓度，他认为这样有利于细胞的贴壁。但是我培养的时候没有按他的方法配制N2，还是用的invitrogen商品化的N2，觉得效果也不错。1 S! N( w* f" ^

. ^9 h+ P5 [' I# G3 K* p    再者，我是用sigma的Accutase消化的组织（37oC，15－20分钟），觉得细胞的活性很好。
3 V/ B* m% J2 Q: e2 D/ n$ `% N: B. Q' b, l' E, |% j8 A
    最后补充一下，这个方法不是什么新东东，在一些研究神经干细胞的实验室这是一个很成熟的方法。只要认真按照经典文献去做，一定能够成功的。
1 M9 o$ p8 T) y( v' }: N9 i  M$ H1 ]2 l$ s" e. q4 d6 f; Q& G! G9 @
    祝好运！！

smkx

3 l; Q+ F. F# m0 h5 E
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回复 4# 深海寂寞鱼
+ B& }6 ^% G$ C# _. H8 [4 a5 o, U
  C5 Q6 Z: c. l' _% L) b3 _' B: S3 l* M6 O3 t. X8 Z' W
    谢谢这位前辈高手，不知道您说的经典文献是哪些篇，可以传上来或者告诉我title吗，再次感谢！

深海寂寞鱼

回复 5# smkx / b" U! ]& @; }

; T8 B- ~' |& Q% o& e- xto smkx兄：" `- E. X! o4 u: I# _  O

7 H  _- O& i  C5 @8 }* ?    这方面研究中，有三篇文献相对比较经典，分别是：' {7 n8 k. ^1 y  {/ G( B0 W

; f" ]: z3 q5 l  P1. Conti, L., Pollard, S.M., Gorba, T., Reitano, E., Toselli, M., Biella, G., Sun, Y.,Sanzone, S., Ying, Q.L., Cattaneo, E., et al. (2005). Niche-independent
+ h4 H3 K; u" `% |8 ?, h; j8 rsymmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell. PLoS Biol. 3, e283
& G7 d7 X" x6 C- f2 U* ]! u- g% W, G0 X! }' h& m
2. Pollard, S.M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., and Smith, A. (2006). Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cereb. Cortex 16(Suppl 1), i112–i120.
* ~+ N3 Y" R  F
7 g. s& h4 Y8 N1 h3. Sun, Y., Pollard, S., Conti, L., Toselli, M., Biella, G., Parkin, G., Willatt, L., Falk, A., Cattaneo, E., and Smith, A. (2008). Long-term tripotent differentiation, n& r( b8 j. k  z2 c  U, ?& j
capacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Mol. Cell. Neurosci. 38, 245–258.
( d  S3 b/ [1 Y$ A# K- ?: q8 }: `+ w
全文PDF版如下，希望对你能有所帮助。
2 f  r3 d7 J4 b2 w# g3 P' a1. 1 v( y8 P4 o$ v# r( L5 E( I, w
2.
( Z( A" r0 p# p' O7 I9 ?! S/ q3.

leedh1223

我想问一下用贴壁培养的方法来培养神经干细胞，从原代取材就开始的吗？还是到后期才换用这种方法的？

leedh1223

还有，贴壁培养干细胞，那它分化的比例高吗？

smkx

回复 6# 深海寂寞鱼 % R- i3 q0 X# j

5 H8 f3 r9 D, K  I5 e+ u. x
7 y0 c+ H- F/ n. @    您真是好人。

深海寂寞鱼

回复 7# leedh1223
6 b2 ^3 X0 U3 W" a$ d  e7 t; Y$ G8 ?; X5 j
to leedh1223:2 i% `9 O/ p3 I; W7 r5 r2 B: Q, L
   
- [: K) s6 p) R1 _9 M0 H. m* ^1.     用贴壁方法培养神经干细胞既可以直接从原代取材开始，也可以将你已经养成的神经干细胞换用这种方法。如果是后者的话，你只需要将你的神经球消化后直接接种到包被好的培养瓶/培养皿里即可。
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( d/ J" v% y* A* R0 X) S2.     贴壁培养下的神经干细胞分化的比例不高，如果需要分化的话，根据你想要分化的方向改变培养基就可以了。具体你可以看看我上传的文献。( ^4 C/ a  [9 P# ~! o  {
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     如果有问题，咱们可以再讨论。