贴壁培养神经干细胞

smkx

请问有没有人用贴壁培养的办法养NSC?
* `' `7 }1 J$ t! K. j效果如何？

iseeyou1210

上周去uk开会听人说了,效果还不错,我正在要protocol.$ c. T! |3 T( m; v  i/ }
等等把.

smkx

回复 2# iseeyou1210 + ]6 u$ \' B1 ?2 X3 T. s& Q

7 S3 y& j# _$ o* u' F& s6 Y
$ q, w9 {7 G/ H& U    好，等你好消息

深海寂寞鱼

to smkx兄：
# F. N" A/ D, h: S% p# o5 ]) w3 [, Z; G4 v. m$ j! ~9 Q& }6 l
    贴壁培养神经干细胞效果十分不错，细胞的增殖状态要比悬浮的神经球培养好很多；
6 U! j: T5 M% G9 X
6 q& J& R5 k. g6 P3 [. H: \    而且未分化细胞的比例也高。
' U. s& q, S* S, k; b8 B0 Y$ |& a6 h/ y1 E; q( u1 T1 D+ B8 [( ]2 c
    培养的方法和咱们通常用的方法大同小异。
- b! H2 _/ t. Q4 u0 H6 m* u  I2 \* i% t7 |3 F+ U
    首先注意把培养皿／培养瓶要用Laminine包被好，通常是按1－2ug／cm2，37oC包被过夜。说明书上说的是包被3小时，但是包被过夜效果会很好。- F' c2 ]+ Z8 q$ M* X- f
6 k0 Z* A0 p  w
    ～～～～，不过Laminine可是相当贵的，每用一点点我都心疼不已。
* Y: z! e5 M8 E4 r4 W' h
* G: k( c: x8 D1 a- n' Y    其次，这个方法最初作者的培养基里N2是自己配制的，提高了N2里每个组分的浓度，他认为这样有利于细胞的贴壁。但是我培养的时候没有按他的方法配制N2，还是用的invitrogen商品化的N2，觉得效果也不错。. w: |2 n3 ]  J3 r; c, G

4 E2 m+ l% M! T% |    再者，我是用sigma的Accutase消化的组织（37oC，15－20分钟），觉得细胞的活性很好。5 n$ a; K" U1 z- z) S
; x% S/ m* K6 m4 y( c0 z
    最后补充一下，这个方法不是什么新东东，在一些研究神经干细胞的实验室这是一个很成熟的方法。只要认真按照经典文献去做，一定能够成功的。) k, A, E0 L% v

8 }+ f" h8 G/ ]9 z    祝好运！！

smkx

! O0 n- S9 }7 q) k
# c7 V1 v" S' d8 ^* d$ S回复 4# 深海寂寞鱼 $ y; n! c7 y& ^; ~# |
5 K' q: f/ r/ u$ V3 ?
7 r  L/ q. y. X, A0 k# }
    谢谢这位前辈高手，不知道您说的经典文献是哪些篇，可以传上来或者告诉我title吗，再次感谢！

深海寂寞鱼

回复 5# smkx . l0 h7 F% C  x/ x# ?3 x) j
7 w% t0 P5 G- r, u6 d" ^" f, M
to smkx兄：
8 U: x" W' r9 _( ^! |4 a0 z# D! D9 h* w1 A( v" A
    这方面研究中，有三篇文献相对比较经典，分别是：; D$ ^0 v2 d+ ?% F* t
6 C# _) a5 g& i* B
1. Conti, L., Pollard, S.M., Gorba, T., Reitano, E., Toselli, M., Biella, G., Sun, Y.,Sanzone, S., Ying, Q.L., Cattaneo, E., et al. (2005). Niche-independent
2 M( \  n0 D& ]0 P8 \! T) Z; G& ysymmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell. PLoS Biol. 3, e283
& f- y4 {1 X2 A6 c" L3 e& [- @' f+ v/ o* J( D/ w# N; v( I
2. Pollard, S.M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., and Smith, A. (2006). Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cereb. Cortex 16(Suppl 1), i112–i120.
$ O% _/ O% F5 ]0 \- j; Q- j
; {" ?$ |9 B$ D9 m3 u# u3. Sun, Y., Pollard, S., Conti, L., Toselli, M., Biella, G., Parkin, G., Willatt, L., Falk, A., Cattaneo, E., and Smith, A. (2008). Long-term tripotent differentiation
' s9 s, B; G4 K  F3 R& C4 u5 hcapacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Mol. Cell. Neurosci. 38, 245–258.
: |% n0 w2 C% o8 }/ k( U' I; z
! w7 }1 j3 M/ o. w4 J7 i全文PDF版如下，希望对你能有所帮助。
+ `! |' N4 X/ h2 Z) l. q1. " o. J6 e. m! A3 Q
2. 8 H) f3 Y) j& H
3.

leedh1223

我想问一下用贴壁培养的方法来培养神经干细胞，从原代取材就开始的吗？还是到后期才换用这种方法的？

leedh1223

还有，贴壁培养干细胞，那它分化的比例高吗？

smkx

回复 6# 深海寂寞鱼 ) ?7 o) h7 @: {  d1 g

7 q; V, M! B3 w% P
0 }% h8 Z/ j1 ], U    您真是好人。

深海寂寞鱼

回复 7# leedh1223
" R% ^9 u4 X! K7 K, E
6 z' }7 x0 Z2 j* X* K! A, Wto leedh1223:
3 Z; R7 O- F3 K; ]) P& d5 k    " O* }3 ]2 m8 ~& @
1.     用贴壁方法培养神经干细胞既可以直接从原代取材开始，也可以将你已经养成的神经干细胞换用这种方法。如果是后者的话，你只需要将你的神经球消化后直接接种到包被好的培养瓶/培养皿里即可。) @9 V& h# J9 }; ?

& r9 a' I9 b! V2.     贴壁培养下的神经干细胞分化的比例不高，如果需要分化的话，根据你想要分化的方向改变培养基就可以了。具体你可以看看我上传的文献。" q/ n8 ~: g3 m7 f8 E" f; b: A0 J

7 R9 `/ r& L2 H0 @  r: M     如果有问题，咱们可以再讨论。