iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
1 k4 f% H& f/ _* Z4 {( c9 x4 ^我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？
7 ?" T; \7 P2 O& ?& p, u

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；
; K, A; E, T1 n8 P/ r4 D/ W2 v如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 ) \4 E$ ^' O  l
用PBS洗涤了吗？

3 n7 K* Z: c7 [. M  L" O洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 9 d* x8 |3 [$ c
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

' K" r4 l, q4 I' d6 W0 P
呵呵 还行请教下您啊
/ c* ^  g# w/ M3 }8 d那MEF细胞也一起下来了啊
- @1 P9 H( g+ y0 S9 m8 o为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
. V6 L2 r+ M8 M8 w6 Y( @0 x' l时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……( ]0 u$ n1 g% Y2 m9 g$ X3 N% A

ly200101042

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/ F4 b$ L& E0 i; `( A' n9 R7 R# U( j( N
为什么那么长时间啊
' k$ U6 P0 w  W0 \  j7 U您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 ' Q- ]) u8 Z) b' N7 N7 L: N
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

" e- `, U' N1 ?我用的是1mg/ml 应该是1%的吧