iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
2 R4 ?$ i4 p' x( O+ ?5 O* D; o$ j; }我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？) u* E7 |/ {: M& ~. \( p6 T% G. i  P

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；: K6 T7 o/ F& ~2 }8 Z
如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
( K7 m5 X& M2 D用PBS洗涤了吗？

3 d. P2 h1 ?% L( k, s3 ?8 @# O
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22
3 S& a$ {4 b) z& u因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

' X" ?0 o6 }( b! v7 z9 K8 [2 f: o
呵呵 还行请教下您啊
2 ^- i, J2 `$ r4 u8 k那MEF细胞也一起下来了啊
+ C1 }# ]0 [& M5 A! ]/ m: T; z为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
* w* }+ K% D# v* ~, r4 \时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……
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ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子( a4 ^/ r$ a$ }4 S7 v# q7 G: P
# N0 S; ^* T2 f
为什么那么长时间啊 . I1 W3 R7 @1 W; L; N) h4 Z
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50
3 `1 o+ w) S% e  k: [$ Y9 u2 B一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

$ B9 L/ N$ E) h. k. d% U我用的是1mg/ml 应该是1%的吧