请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？' `* Z7 f9 ]# W- f
我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。2 ^1 ~- p7 X- o0 p
欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

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6 \6 F: y  ~0 t% X这样用的板子会不会太多了？

SCNT

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8 s7 B# O. i1 \/ {虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子5 A# y, d; k) H' a& f. [2 `+ b
$ ]+ b: C$ ^5 b) p8 A' _8 G
应该比较纯，好的谢谢你的建议。- R1 L0 y5 p( e* d2 Y% _6 }; M6 v" q
另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子3 X/ M3 d. z+ |  ]$ h

2 Y- x0 g- x! s4 l+ _3 m这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

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' v1 N) j) s$ D9 d( P* @# P
$ n( C9 g( K6 T6 t% j4 W这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

回复 军医 的帖子% ~, g1 `+ J7 m) `; S( [3 a" j

6 c! }( [+ q! F克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.