请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？, ?9 Q& q6 a) _
我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。8 h0 x- v( k$ g9 y' ^; j
欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子5 k6 u7 x. c7 B# Y

: i" j. R& o" ~3 Z7 h这样用的板子会不会太多了？

SCNT

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/ V* ?, ?5 w7 l$ M0 O( ^6 K- W) }; I2 g8 R1 y, @7 L
虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

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. k- @1 u5 P6 p, n9 y# p
; @9 z4 o1 Z0 e& ~0 ~& n: d应该比较纯，好的谢谢你的建议。
3 B% K9 r  h! O6 g4 n9 p另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子" z) K" |+ j" s

5 i* f, o0 |& O5 L0 s& n这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

回复 SCNT 的帖子. L6 ]5 G- ?; Z; D; M2 C# C$ C$ V4 w

7 U. O6 K: R, i8 v1 M这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

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/ H! B1 J: [2 r2 E7 \2 B3 ]
6 j2 t3 @: b2 ], ~! h克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.