请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？# E0 |# r  C5 Y$ o  T, w* O! s
我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。
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SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

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6 e0 u* I, m- u7 m1 S
) m; Y- F  a( a& h2 ]9 g* _5 D这样用的板子会不会太多了？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子. R6 X( M: d! z; h' B! Y" g2 i
. O9 G! R& x  C0 k" ^3 y. _" a  y1 p
虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子4 |/ T% E- @8 _

) y' N/ U7 V. k/ c应该比较纯，好的谢谢你的建议。& b% U5 w+ _8 q" U
另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子) A# E) {2 e9 c' V* u# A- F
1 M8 F! |& k9 w- |" H  v
这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

回复 SCNT 的帖子
& L1 k6 [4 }% _1 z+ o  K+ E( ]! u
2 g1 _. e# e# C; |* U' z8 g这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

回复 军医 的帖子4 [4 G8 ?% d& }, a% h; a1 ~6 |
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克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.