请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？
" Z! X7 x- V% n* i: j; R! f我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。
$ \/ u+ N5 Q! Y* U5 @欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子
$ k: P2 K& b1 g% a3 |+ i' g9 }# m. M5 t$ b/ R; S
这样用的板子会不会太多了？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子
+ G  ]1 m, l/ u
# J- p# T5 V5 {/ W! k6 j. E2 f虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子" y$ m0 e& O* }1 o

4 ]; l" S7 d' Y% h0 K' o应该比较纯，好的谢谢你的建议。: }/ s4 S; e5 S4 p* r
另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子
7 I, P9 r: Q* I0 R+ b
! U- ^+ |$ b) M. S% I4 [这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

回复 SCNT 的帖子# D# O. X4 `. k+ ?7 I9 G- }# t

- Q5 X. b3 x+ a" I# J这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

回复 军医 的帖子" @6 h2 }9 `  ~4 H- `
/ V) m( V/ k" ~' d4 z
克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.