新手ips培养18天形态请教

jane2011

本人第一次做ips诱导，在day10的时候看到有貌似克隆团的出现，但克隆团边界不清，现在已经day18天了，肉眼可见很大的细胞团，100X的显微镜视野下也看不完整个细胞团，不知道是什么，把图片发上来请教大家，谢谢！

bb6120

你这个应该不是ips克隆，在体视镜下，应该是看不清楚的细胞的范围。

song58

不知道你做的是人的还是鼠的iPS...' z( r' E  ?9 s9 Y
不过，兄弟，我几乎可以确定这样的所谓克隆不是iPS，无论人还是鼠的iPS都是有较为清晰的边缘，克隆里的细胞也比较致密。
2 r9 O1 O/ U# t$ i* l, p/ b个人感觉，克隆形态是早期判断iPS很重要的一个标准。9 S6 O. e; M4 H! D+ R) X" J9 x
你这个细胞团有可能是fibroblast中一些杂细胞扩增的结果，或者是诱导后产生的杂细胞（例如脂肪细胞）扩增的结果

majing217

这个是克隆吗？怎么这么小啊，而且形态好奇怪啊，感觉有点像分化了的。

dianying

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" ]2 z1 ?- U  w. t6 a0 \6 R( L* R; I% _' U3 S1 h
我也觉得不像，好像是杂质。感觉兄弟song58 说得有道理。

ljzmy82

不是ips，ips边缘清晰

jane2011

谢谢各位，我也觉得形态上一点也不像ips,这个没有边界，而且还一直在长大，有可能像song说的那样，是杂细胞扩增的细胞团。我也是第一次诱导ips,实验室也没有做干细胞的，只有发上来请教各位了。马上要做第二次诱导，希望能出结果。另外想问一下，冻存的HFF是不是很难诱导，HFF一般几代以内做诱导比较合适？谢谢

jane2011

谢谢各位，我也觉得形态上一点也不像ips,这个没有边界，而且还一直在长大，有可能像song说的那样，是杂细胞扩增的细胞团。我也是第一次诱导ips,实验室也没有做干细胞的，只有发上来请教各位了。马上要做第二次诱导，希望能出结果。另外想问一下，冻存的HFF是不是很难诱导，HFF一般几代以内做诱导比较合适？谢谢

sdjjfangfang

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! {7 ]7 G7 A' l9 }冻存的HFF进行诱导是没有问题的，当然如果能有现分离的会更好。HFF一般传代4～5代作用进行诱导。如果细胞够纯，尽早做诱导会更好

jefferson

这种细胞团不会是iPS, 就像大家所说的, iPS诱导出来后, 形态很典型, 镜下很容易辨认出来. 在诱导过程中, 会出现大量的不完全诱导细胞团, 就是说有些细胞也因为转录因子的导入, 细胞内基因表达谱发生了改变, 导致细胞生长及增殖能力发生了改变, 这些细胞与起始的细胞已发生了改变,但又不是完全诱导的iPS细胞,因此成为中间态的不完全诱导细胞.这些细胞在诱导过程中有的也会成克隆装生长,有的甚至有比较清楚的边界, 但跟完全诱导的iPS还是有很大区别, 主要表现在,克隆不平坦, 培养时间长后会隆起, 镜下看发黑(不是单层细胞, 透光性差的原因),克隆内部的结构也不够致密, 继续培养后克隆内部会脱落等. 而有的不完全诱导的细胞更是呈现杂乱的生长状态, 仅仅成团, 没有克隆形态, 第一张照片的细胞团个人判断就是这种情况.' r2 H7 z4 q) f2 d! Q( U0 t" z" i

7 ]" y0 I/ o( ~7 u' X+ Z这个照片不是相差的,看不清细胞团的结构. 如果有相差照片更好判断.