有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

markllq

* E7 L& S& J6 o  V- l8 s9 M" {   一直在建EMT model，已经三四个月了，几乎没有什么进展，尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞，通过过表达snail诱导，real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高，但是很奇怪，细胞一直看不出明显的形变，检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。' J6 M, K- R% a: d
   后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE（immortalized human mammary+ R4 W$ I. k8 ~' Y) h
epithelial cells）细胞系，这个属于正常细胞系，研究起来更容易。我们尝试用snail，twist以及tgfb三种方式诱导，从weinberg以前的paper来看，诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散，并且形状很长的细胞，但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后（已经是第9天了），还是没有看到明显的形态变化。
' o4 \6 Q' [) o. A    weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚，所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题，这株细胞培养时是不能加血清的，诱导EMT的过程没有血清会不会有影响？另外，感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养，还是需要换成其他的培养基？
5 l$ x2 u7 M, F" `9 Z
0 |( S) k) W4 c; F恳请有EMT经验的同胞指点，不胜感激！
# k+ E: h& N" Y2 p# x

胡问成

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# Z, P' F' }0 C( H
+ z9 D% a- i' M5 S  m0 r$ O! |4 X# o不是还可以用TGF-b来诱导，同时做，EMT好像对细胞珠有要求吧

markllq

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! G" x; X: k/ F3 D3 A8 W) z/ s
; [1 F" n) z$ o. B3 n& S) x我们也试过tgfb，似乎细胞没有太大变化，似乎看不出明显的形态变化，你做过EMT吗？能不能交流一下？

yac508

你可以看看别人的文章，做EMT转化由很多的模型，从别人的文献中可以得到借鉴  y' E) ]0 M4 }
另外，做EMT的模型是对细胞有相应的要求，并不是所有类型的E型细胞都可以来做; V+ M7 e; F. _1 P. m
据我了解，做EMT转化，肺癌细胞株A549 是一个很好的细胞系。结肠癌HT29不知道
* Z/ j; R7 ~" D. @9 O是否可以诱导

markllq

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" m8 k. |% z8 X" y( i: K" u" P! S. R
非常感谢！我们试过A549，用tgfb也诱导出来过，现在正在摸索HMLE细胞EMT的条件。希望能做出来。

windy19840

楼主，我现在也在做这方面研究，有机会多交流，我Q46942916." @( p7 D5 N& e4 {7 g) H0 D, F/ Z
我主要研究TGF-b对EMT的效应。4 k6 M, ^; b# f/ H/ q4 I- F- {
用nmumg、MCF10A或HDCK是常用的EMT模式细胞，但这几种细胞培养起来不容易，国内货源也很少，所以做EMT也不是很容易。- T; P4 \% v: m$ h* h: r7 i
Hacat是一种研究tgf-b效应的模式细胞，相信如果是做TGF-b诱导EMT是可以成功的。, r* `/ C# i+ V
弱弱的问一句楼主，还有能否问一下你的HMLE细胞能否赠送一些？

markllq

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2 R5 ]* ~' m4 S. `
/ g: w9 v# @+ {" s8 g8 ~你好，我的model现在已经建立好了也比较稳定，其他的细胞系也尝试过。HMLE的细胞我们这里冻了很多，但是毕竟是其他实验室赠送的，我们没有权利再次转赠。你如果真需要的话，建议跟weinberg发封邮件找他们借，weinberg人很nice，他们这株细胞已经借给了很多实验室，他应该不会拒绝。HMLE的细胞系缺陷还是很大的，首先是增殖非常缓慢，诱导一轮EMT下来需要半个月时间，其次是EMT效率不高，很多细胞都不能响应。因此可能有表型也难看出差异，用其他细胞系可能更容易做出表型。

windy19840

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, `' i; U; f0 \& y
: q/ A4 v' b1 i细胞从国外运到国内是很不方便的，我不知道你们当时weinberg是如何送给我的呢？
0 d0 A! [% u. A, D, C; I% J. d+ @还有，你现在主要的诱导模式是什么？是tgf-b还是细胞基质或者什么？( V; u! H0 v- b8 I4 q+ v- N
在此请教了，期待回复，谢谢！

markllq

回复 windy19840 的帖子! B3 |! T& k) U( ~6 v& i% A6 d
7 ]" m+ P3 z" T! }4 `
他们是直接用干冰寄过来的，一两个星期就到了。这种细胞可以用tgfb直接诱导，或者过表达snail和twist都可以。

hunter_33

1 g& M. A+ s) H" o3 N, d  N

, O, E$ k5 x( U- t3 i( C4 A你好，我在论坛里看见你的在用weinberg 的HMLE cell line 诱导EMT，这是一株非常神奇的细胞系，我想请问一下你们是用什么培养基培养的？我们这总是养不好，状态很差。