有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

markllq

/ G  Z$ Y$ l, d# F$ O$ A7 N   一直在建EMT model，已经三四个月了，几乎没有什么进展，尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞，通过过表达snail诱导，real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高，但是很奇怪，细胞一直看不出明显的形变，检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。
$ ]; d1 h0 f+ y8 v4 ]3 X   后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE（immortalized human mammary( C; n. V3 v1 _8 k! i( ^; |
epithelial cells）细胞系，这个属于正常细胞系，研究起来更容易。我们尝试用snail，twist以及tgfb三种方式诱导，从weinberg以前的paper来看，诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散，并且形状很长的细胞，但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后（已经是第9天了），还是没有看到明显的形态变化。9 ]( V1 S% F9 c$ n
    weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚，所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题，这株细胞培养时是不能加血清的，诱导EMT的过程没有血清会不会有影响？另外，感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养，还是需要换成其他的培养基？  S+ F7 j/ ?% P
" Q, Y2 e0 J3 q
恳请有EMT经验的同胞指点，不胜感激！
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胡问成

回复 markllq 的帖子* E2 P! j) n; n2 g8 M0 P3 |
8 |0 s- @+ ]" K
不是还可以用TGF-b来诱导，同时做，EMT好像对细胞珠有要求吧

markllq

回复 胡问成 的帖子5 o# ?$ G2 G& Q: m- j
" K' B# W/ g' U' Y: T0 U
我们也试过tgfb，似乎细胞没有太大变化，似乎看不出明显的形态变化，你做过EMT吗？能不能交流一下？

yac508

你可以看看别人的文章，做EMT转化由很多的模型，从别人的文献中可以得到借鉴
# E4 v: l3 }/ |另外，做EMT的模型是对细胞有相应的要求，并不是所有类型的E型细胞都可以来做
! [% j& w: {2 |" T据我了解，做EMT转化，肺癌细胞株A549 是一个很好的细胞系。结肠癌HT29不知道
6 N+ U+ R) L; R; x3 ^是否可以诱导

markllq

回复 yac508 的帖子) [" B! m2 S+ n5 ?" K! `

* A  M$ f. v( d3 I' ]  d非常感谢！我们试过A549，用tgfb也诱导出来过，现在正在摸索HMLE细胞EMT的条件。希望能做出来。

windy19840

楼主，我现在也在做这方面研究，有机会多交流，我Q46942916.
- J0 |/ g* N! E我主要研究TGF-b对EMT的效应。
& D; A( y5 a/ g( r用nmumg、MCF10A或HDCK是常用的EMT模式细胞，但这几种细胞培养起来不容易，国内货源也很少，所以做EMT也不是很容易。* @. K0 `+ v, a
Hacat是一种研究tgf-b效应的模式细胞，相信如果是做TGF-b诱导EMT是可以成功的。
4 e- M! Z! {/ \( m; [弱弱的问一句楼主，还有能否问一下你的HMLE细胞能否赠送一些？

markllq

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- r7 h% W2 D7 b% U& p, \/ a
+ q% H9 z, u) i5 u你好，我的model现在已经建立好了也比较稳定，其他的细胞系也尝试过。HMLE的细胞我们这里冻了很多，但是毕竟是其他实验室赠送的，我们没有权利再次转赠。你如果真需要的话，建议跟weinberg发封邮件找他们借，weinberg人很nice，他们这株细胞已经借给了很多实验室，他应该不会拒绝。HMLE的细胞系缺陷还是很大的，首先是增殖非常缓慢，诱导一轮EMT下来需要半个月时间，其次是EMT效率不高，很多细胞都不能响应。因此可能有表型也难看出差异，用其他细胞系可能更容易做出表型。

windy19840

回复 markllq 的帖子7 N" ^# v6 w! m7 I4 F9 B
+ {, E3 l- L. z' l/ w
细胞从国外运到国内是很不方便的，我不知道你们当时weinberg是如何送给我的呢？2 V. T  Q5 S' |3 Z! s
还有，你现在主要的诱导模式是什么？是tgf-b还是细胞基质或者什么？
1 k7 h9 o; Z6 _% W! d+ o在此请教了，期待回复，谢谢！

markllq

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( e+ H: ^3 X, F: T" n0 c0 n
' x: [* {! s0 y# P, w他们是直接用干冰寄过来的，一两个星期就到了。这种细胞可以用tgfb直接诱导，或者过表达snail和twist都可以。

hunter_33

) \( N; P+ j! r6 O  q; t2 W

8 C! F# v' E: g# H: w0 V你好，我在论坛里看见你的在用weinberg 的HMLE cell line 诱导EMT，这是一株非常神奇的细胞系，我想请问一下你们是用什么培养基培养的？我们这总是养不好，状态很差。