细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

, x) z4 Q  U1 w

* ^4 i9 T% X1 l+ @. ^最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。
/ S6 c& b6 r$ d( q, N7 N, k2 h不知道问题出在什么地方，怎么解决
6 `. V5 H7 `# i/ k大家有没有遇到同样的问题

coffee.cat105

你用的什么公司的胰酶、

yuhaoze

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' ]+ ?% K0 |2 J7 }5 `) L5 K. g- c7 f0 L: S9 ?
sigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？7 i# |- X2 b0 P

yuhaoze

回复 coffee.cat105 的帖子4 e" g1 N% d% X9 Z6 i% I' A( M) v
3 |% L; t: C0 T9 j& Q6 I
加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

coffee.cat105

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你8 X9 P/ b8 \8 m  R# M6 e

WAX

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

yuhaoze

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2 g$ s  G( D$ r8 O/ K+ R: e
+ ^8 d  h1 @: B% _% r( }4 Y
如果是这样的话那真需要警惕了

WAX

回复 yuhaoze 的帖子1 n7 m( l0 q9 z3 ^' a
+ F; i; K9 T6 A( M* z
粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

yuhaoze

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* V/ ]) m0 u+ r9 Q2 \) _好的'谢谢

wangzhiqi86

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# a0 s0 N- \5 e" V; ^  k! J) u/ X6 n3 w4 Z3 P# n% T, z1 H
极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。: `3 }" |+ ]8 J4 L  p
我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。
9 h# m; p7 U5 W' ^& }8 ~胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。