再发图！用Ficoll分离脐血后的效果（15ml和50ml离心管）

huajie881026

前不久，做脐血MSC分离，用50ml离心管分离后，白膜层不清晰，故发了一帖http://www.stemcell8.cn/thread-58525-1-1.html
' s+ G) q4 E# f昨日又做了一次，分别用50ml和15ml离心管都做了，还是按Ficoll说明书来，500g  20℃  30分钟，结果50ml管还是“白雾”层，15ml就是大家所谓的“白膜”层（下图），可见是离心管的不同导致了分离后分层的区别。7 v) J" U' \: P4 |5 L$ M" V2 b
可问题又来了，我100ml脐血，用100mlPBS稀释，再用100mlFicoll分离，这得要20个15ml离心管来分离啊，这得多浪费啊。不管怎么样，我还是用50ml的离心管先做了，我相信能得到MSC！！！# P! h3 Z3 I5 J; @

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透明之蓝

回复 huajie881026 的帖子7 [/ N* |5 v/ P4 \. g* e
$ P7 L  G$ d, F  r# y! X, X" e3 ~0 ~
恭喜！！！

crazytime

不同脐带血的差异很大，这份脐带血的分离后，红细胞层有点厚了，可以试着多加一点PBS

ditiger

可以试一下先甲基纤维素沉降，再ficoll离心，效果会好很多~~

huajie881026

回复 透明之蓝 的帖子
* R" |) l8 K5 L+ i/ B' I7 h9 G6 N: A
  i- N  ]& e: |# M1 E* t" }4 ]hUCB-MSCs（如下图）! A' e( I8 ^+ U* G

4 D9 s; L+ x$ n2 w4 h8 y3 Z, K养了四份脐血就成功这么一次！

huajie881026

回复 qiugt0819 的帖子) [0 v* P& f1 H: Q: e8 d
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是的，红色的点可能是血小板，因为血小板也在血清与ficoll之间！

qiugt0819

想问一下楼主白膜层是刻度7cm和8cm之间有点带红那部分吗？？？

cjsbaicai

我觉得15ml效果好就用15ml的，50ml做了，到时候纯度等其他不确定因素会影响你后续试验，那也挺不值的

fenglinzhu

当然是用15ml的离心管效果好啊。但是之前我也看到人家分离外周血免疫细胞的时候用50ml的离心管分离的，他们好像稀释倍数蛮高的，而且他们好像只装40ml吧。500g离心30min，减速度调到0，效果比你的好多了的。你的分离效果不好可能就是你稀释倍数太少的原因吧，浓度过高的话分离效果肯定不行的。我之前做的是间充质干细胞的分离，也是稀释很多倍的，但我们用的是percoll,15ml离心管，离心20min，效果很好。

qiugt0819

我最近也在用ficoll液分离minipig的骨髓间充质干细胞，目前也遇到了分层不清晰的情况，还在摸索中~