第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

没有过筛，剪完消化后直接装T75培养，很多组织块还贴在瓶壁上，还有细胞好杂啊，细胞形态也不均一，我三个胚胎一个瓶，长得真快，过夜就的消化了，不知道怎么处理，尤其怎么去除那些组织块。
! V  `$ g  I0 s8 ], p8 R还有大侠们帮看看分得细胞。
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jun8013

最后一个应该是就是组织块
  C* Q$ l' c: m$ C" D* E" U请教，下面怎么消化传代，主要想去除这些组织块，或者对后面实验有无影响。2 m8 w6 `/ ]( ^7 `4 m) ?
大家帮看看这MEF对吗，状态如何。

huangcong1988

组织块贴壁没那么紧的，只要晃动一下就脱落了，而且还要用PBS洗的啊，洗完基本就没什么组织块了，然后就是，你这个没标照相倍数，没法判断细胞是否均一，另外一点，这个原代的MEF，你不会就要用于feeder制作吧？肯定要传两代啊，这样细胞会变得纯一点。

huangcong1988

如果担心组织块影响的话，下次滤一下，大概100目就行了，滤完会很干净，没有组织块，还有一点，3个胚胎一个T75瓶太浪费了，大概一个半胚胎一个T75瓶就行了

jun8013

# o9 Z& z+ \0 `6 c
( B2 U+ M  j' r" I* C4 V回复 huangcong1988 的帖子: h. h8 m! _7 g( s& {4 P" Q
( b7 Q: \2 a5 Z6 j! N: q
谢谢大侠指教，第一次分，也是在论坛上搜得，分离躯干时，剪的比较狠。。。。。感觉四肢难剪。。。。所以剩下的比较少，就三个一个T75，今天发现满了，打算穿下代，看看状态，那个是用10倍物镜看的。。。求指导

jun8013

回复 huangcong1988 的帖子7 c, b7 R. y+ u* v' p& Y/ K0 u& t1 ]* `' D

9 G" D5 k% m6 W8 e用PBS洗了5次，感觉壁上还粘着些，打算消化时自然沉降一会试试

dilal

MEF原代时就会有很多杂细胞，传代2次后基本上就剩MEF了，所以不用担心，等你用第三代细胞是基本上已经很纯了

jun8013

回复 dilal 的帖子$ m1 k  h9 M+ [; Y+ g8 I/ Z, q

' V1 R& R& x) G! G2 c- I十分感谢指导~还有想请教下，P1保种好，还是P2好些。一个T75包几管合适。。。。

dilal

我一般做完原代就会冻存上一批，留上一瓶，传代到第3代后丝裂霉素处理，然后再冻存一批。

Donnies

你先把细胞传三四代之后，再看看结果怎么样，不同的细胞所需要的培养不同，像那些组织块，传三四代之后无法维持其继续生长就会消失的，另外传代的时候也需要注意一下，消化的不要太厉害，细胞一开始变圆就可以停止消化，不要等到细胞都漂起来了，再去终止