脐带组织块贴壁法求助

单个核细胞

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" b- t6 ~6 u/ j: Z
传代用0.25%胰酶即可，T75瓶培养，1:3传代，也可以根据需要接种相应的细胞数，比如2×10^4 cells/cm^2，1×10^5 cells/ml 等等。

湖南干细胞

回复 spring1221 的帖子! `$ P, E: S4 a/ L7 [3 k# R# Y
5 D0 i6 M, p& r7 T. g  R0 f
好的，谢谢。

spring1221

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6 F8 U% D( d9 F* q8 \6 H; s: c
& {3 X) X7 A! O9 D7 V; U$ e第一次加液一定要从侧面贴壁慢慢加然后平放，不要直接冲过去。组织块铺的时候的湿度也确实需要注意，加油

湖南干细胞

回复 漂泊的风 的帖子- {0 {5 ?' q& t8 \( k

5 f9 o8 a; n( h6 S哦，谢谢。

漂泊的风

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  H, \6 i4 H2 A# F% \
0 _, }7 A8 v" [$ ?* u2 W一般不需要的，除非脐血残留比较多，整个组织块是红色的，这时需要用PBS洗涤一次，否则不需要

漂泊的风

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8 u: F% P5 z$ l( K  d, q# ?' f" @5 A, x1 k& O
不需要的，直接底部贴壁即可，很容易爬出来的细胞，一般5天即可看到细胞

湖南干细胞

总结了一下各位前辈的回复，我想可能贴壁不牢主要在于，组织块刚接种时，组织块太湿；第一次添加液体时液体时枪头的冲力比较大，细胞容易在添加培养液时被冲下来。所以，打算改进这两点。

湖南干细胞

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" t5 l+ ~/ [, D
( p3 k, h2 M6 l8 N谢谢指点。

湖南干细胞

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! _( L8 A% F2 e2 \' g5 R9 M& ^  L2 h* s0 x: t0 `6 N" f9 D/ _! Z4 A5 u
谢谢，我确实发现以前没有洗涤的组织块贴壁牢些，我有一次细胞传代了，结果传代后细胞就一蹶不振了了，你也用0.25%的胰酶消化传代吗？我也看很多人用0.05%或0.125%胰酶消化，1:2传代？

单个核细胞

回复 湖南干细胞 的帖子: ^3 |# q, |" x8 @6 w3 r1 f
  g$ t6 O, u+ \6 Z- K8 f2 m
几条建议：3 _: v$ M' @9 q
1.华通胶剪碎后不要洗涤，直接接种组织至培养瓶/皿。
- W2 S/ c* z7 @2.若是采用进口（康宁等）培养瓶/皿，不需要FBS包被。; _, Z  v# e" m5 n  B
3.贴壁3~5小时后补加培养液(下午接种的可以第二天加液，即贴壁过夜)，加液后的培养瓶/皿就不要经常动它了。' e) u/ t1 K2 K) ^
4.第二天观察是否污染，8~10天后观察是否有细胞爬出。% _% T4 x2 b8 W- A: ]) V/ y8 z3 \5 U
5.细胞爬出后，可去掉旧培养液和组织块，换新培养液。9 X7 e& E' N5 n- F& ^) C9 Z! s" k) @2 f
6.待贴壁细胞局部生长致密时，常规方法传代。